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| 1 | 中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究 Ⅰ.玉米品种纯度及真伪鉴定中SSR技术标准实验体系的建立显示文摘本研究从DNA提取、PCR扩增、电泳检测等环节对SSR技术进行了优化,最终建立一套完善的适用于玉米品种鉴定的SSR标准体系。并以玉米杂交种农大108的纯度鉴定为例,探索了该体系在玉米杂交种鉴定中实际应用的可行性。 | 王凤格 赵久然 郭景伦 刘龙洲 | 2003 | 玉米科学2003，11，1： | 102 |
| 2 | 中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究 Ⅱ.适于玉米自交系和杂交种指纹图谱绘制的SSR核心引物的确定显示文摘本项研究利用60个玉米自交系对初选出的158个SSR引物对进行进一步筛选,综合考虑PIC值大小、扩增带型统计的难易及引物的重复性高低,确定bnlg439、bnlg125、phi053、bnlg197、phi072、bnlg238、phi126、bnlg161、bnlg240、bnlg619共10个引物对作为构建玉米自交系和杂交种指纹库的核心引物;同时提出适用于计算玉米SSR指纹图谱概率的公式:P=1/N,对自交系N=n;对杂交种,N=Cn1+Cn2。n为所用引物的等位基因数。 | 赵久然 王凤格 郭景伦 陈刚 廖琴 孙世贤 陈如明 刘龙洲 | 2003 | 玉米科学2003，11，2： | 123 |
| 3 | 一种改进的玉米SSR标记的PAGE/快速银染检测新方法显示文摘聚丙烯酰胺凝胶电泳技术由于其检测灵敏度和分辨率高的特点.特别适合于像SSR这样的小片段扩增产物的检测。银染法是其常用的显影方法之一,不同的银染法操作步骤及采用试剂有一定差异,主要集中在固定液的选择和洗脱次数上。本研究在参考以往各种银染法的基础上,进一步简化操作步骤,仅需染色和显影两步即可进行结果的判读,将其应用于玉米SSR标记的PAGE银染检测,为SSR技术在玉米种质纯度及真伪快速鉴定上的应用提供技术方法。 | 王凤格 赵久然 郭景伦 余花娣 刘龙洲 | 2004 | 农业生物技术学报2004，12，5： | 71 |
| 4 | 玉米品种SSR标记毛细管电泳荧光检测法与变性PAGE银染检测法的比较研究显示文摘以192份玉米品种为材料,用7对SSR引物对毛细管电泳荧光检测和常规的变性PAGE银染检测两种SSR标记检测方法进行比较分析。结果表明,两种方法检测的SSR标记片段大小一致。毛细管电泳荧光检测法检测的结果更为精确、灵敏、高效,更适用于高通量材料的检测分析。对少量材料进行检测分析以及SSR标记的筛选时,使用常规的变性PAGE银染检测法更经济适用。 | 易红梅 王凤格 赵久然 王璐 郭景伦 原亚萍 | 2006 | 华北农学报2006，21，5： | 61 |
| 5 | 比较三种DNA指纹分析方法在玉米品种纯度及真伪鉴定中的应用显示文摘本项研究归纳出三种DNA指纹分析方法 ,即特征谱带法、引物组合法和核心引物组合法 ,并比较了这三种方法在玉米品种纯度及真伪鉴定中的应用价值。在玉米基因组上均匀选取 6 2对SSR引物对 6 0个玉米自交系进行分析。 6 2对SSR引物共检测到 2 38个等位基因变异 ,平均每个位点的等位基因数4 0 8个 ,平均多态性信息量 (PIC) 0 6 12 ,平均标记索引系数 (MI) 2 5 8,评估引物多态性的三个指标并不完全一致。三种方法的比较研究表明 ,特征谱带法仅在固定的材料范围内有效 ,当扩大范围后 ,原来具有特征带的样品往往不再具有特征带 ,且需要筛选大量的引物 ,效率很低 ;引物组合法通过不同引物的有限组合 ,完全可以区分全部材料 ,避免了筛选大量引物的工作 ;核心引物组合法是引物组合法的扩展 ,不同实验室通过使用固定的一套核心引物组合 ,其指纹图谱可以相互比较和整合 ,为玉米DNA指纹图谱分析的标准化奠定基础。 | 王凤格 赵久然 郭景伦 佘花娣 陈刚 | 2003 | 分子植物育种2003，1，5： | 62 |
| 6 | 适用于SSR分子标记的玉米单粒种子DNA快速提取新方法显示文摘研究了玉米单粒种子DNA的提取新方法,利用该方法提取DNA,液氮、研磨、离心、沉淀、SDS、CTAB及氯仿都不用,一个工作人员提取100粒种子(1个检测样品)DNA只需30min左右,一天可以提取1600粒种子(16个检测样品)的DNA,并且提取的DNA分子量大,不降解,完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。 | 郭景伦 赵久然 王凤格 | 2005 | 玉米科学2005，13，2： | 53 |
| 7 | 中国玉米新品种标准DNA指纹库构建研究的几点思考显示文摘概述了中国玉米新品种DNA指纹库构建研究中的五个主要问题,即选用哪些品种材料、选用什么标记方法、SSR标记存在哪些问题、选用哪些SSR引物及如何提高建库效率等,并提出了相应的解决方案,对其应用前景及主要应用领域进行了探讨。 | 王凤格 赵久然 郭景伦 孙世贤 | 2005 | 植物学通报2005，22，1： | 46 |
| 8 | 应用RAPD分子标记技术对我国骨干玉米自交系进行类群划分显示文摘利用RAPD分子标记技术,对我国目前25个主要玉米自交系进行亲缘关系类群划分。本项研究建立了从玉米种子、幼芽以及叶片组织中提取微量DNA的方法。从RAPD引物试验盒A至O共计300个引物中,筛选出对玉米扩增产物具有多态性的引物40个,其中具有特别明显多态性的引物10个。它们是F3、O20、A19、M2、M6、N11、N12、N19、C7和G14等。依据10个引物扩增谱带建立0,1型数据,计算25个自交系间遗传距离,并进行聚类分析。结果表明:供试的25个自交系共可划分为5个类群。Ⅰ类为四平头血缘系统:包括黄早四、吉853、黄野四、四自四、196、81515、404、H21等共8个;Ⅱ类为瑞德黄马齿血缘系统:包括478、488、3189、7922、8112、B尖8、5005等共7个自交系:Ⅲ类为兰卡斯特血缘系统:包括Mo17、早49、多22等共3个;Ⅳ类为旅大红骨血缘系统:只有E28一个自交系;Ⅴ类共有P78、9502、178、P138、007、P17等6个自交系。这一类群都是由杂交种P78599后代选系而来,与美国另外两个类群瑞德黄马齿系统和兰卡斯特系统关系较远,它们之间选配的杂交组合大多具有较强的杂交优势。? | 赵久然 郭景伦 郭强 尉德铭 孔艳芳 | 1999 | 华北农学报1999，14，1： | 50 |
| 9 | 中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究 Ⅲ.多重PCR技术在玉米SSR引物扩增中的应用显示文摘根据21对玉米SSR引物扩增片段大小范围组成不同的引物组合进行多重PCR反应的研究。在与单一PCR相同的反应条件下,47个两重PCR组合出现5种不同的扩增情况,其中30个组合扩增正常;10个三重PCR组合中有9个组合扩增正常;两个四重PCR组合中有1个扩增正常,这些筛选出的正常扩增的组合可应用于今后玉米DNA指纹库构建研究中。研究表明,应用与单一PCR完全相同的反应条件,大部分能够获得正常扩增的多重PCR组合,在此基础上提出了简化的多重PCR优化程序。 | 王凤格 赵久然 佘花娣 郭景伦 陈刚 廖琴 孙世贤 陈如明 | 2003 | 玉米科学2003，11，4： | 48 |
| 10 | 玉米DUS测试标准品种的SSR分子指纹图谱的构建显示文摘研究了39个玉米DUS测试标准品种的SSR分子指纹图谱的构建方法。结果显示:①用改良CTAB法得到的玉米DNA的A260/A280为1.82,A260/A230为2.02,其条带清晰,降解少,质量明显优于SDS法;②从所用的国内外63对核心引物中筛选出PIC值高、条带清晰、稳定性好的20对玉米SSR核心引物;③用8%聚丙烯酰胺电泳在20对引物扩增产物中检测出了171个位点,PIC值为0.855 4,远远高于3%琼脂糖电泳,更适合DUS测试;④建立了DUS标准品种SSR分子指纹图谱,为DNA检测方法在玉米新品种DUS测试中的运用奠定了基础。 | 张金渝 张建华 杨晓洪 金航 米艳华 肖植文 孔令明 肖卿 | 2006 | 玉米科学2006，14，4： | 35 |
| 11 | 适于玉米杂交种纯度鉴定的SSR核心引物的确定显示文摘为了确定一套适于玉米杂交种纯度鉴定的核心SSR引物,利用10个SSR引物对420份已知玉米(Zea mays)杂交种进行DNA指纹分析。综合考虑多态性和杂合率两个指标,确定bnlg161和bnlg1450为玉米杂交种纯度鉴定的首选核心引物,利用这两个引物进行筛选,412个品种(占98%)能够找到具有杂合带型的鉴定引物,确定5个引物bnlg439、bnlg125、umc2105、umc1705和bnlg1792为玉米杂交种纯度鉴定的备选核心引物。研究了纯度鉴定所用特异引物的选择,将特异引物分为两类:第一类是利用单个引物检测,某品种的基因型仅出现1次,将该引物作为该品种在特定品种范围内的特异引物,在420个品种中,累计29个品种具有第一类特异引物,其中umc1705和bnlg1450作为特异引物的次数最多,均为8个,phi072和phi065没有作为特异引物;第二类是根据引物基因频率表,将预测基因型频率低于2.40E-03(即1/420)的基因型作为特异基因型,除了phi072和bnlg161外,其它8个引物均可能成为具有特定基因型品种的第二类特异引物。利用推荐的7个纯度鉴定用核心引物可进一步筛选每个玉米杂交种的双亲互补型引物,建立了已知玉米杂交种的纯度鉴定DNA指纹图谱。 | 王凤格 赵久然 王璐 易红梅 郭景伦 戴景瑞 原亚萍 卢柏山 杨国航 | 2007 | 农业生物技术学报2007，15，6： | 39 |
| 12 | 利用DNA指纹鉴定玉米杂交种纯度及其真伪技术的研究显示文摘从500个随机引物中筛选出30个在玉米上具有较好多态性的RAPD随机引物,并进一步筛选确定了适合我国主要玉米杂交种及其双亲的特异引物,建立了相应的DNA指纹图谱。杂交种的DNA指纹图谱表现为父、母本双亲带型的互补,均未出现互补带型之外的新带型。应用RAPD技术获得DNA指纹图谱的方法可以简便、快捷、经济、准确地鉴别玉米杂交种子纯度及真伪。目前已进行了上百份的检测实践。 | 赵久然 郭景伦 孔艳芳 池书敏 尉德铭 滕海涛 | 1999 | 玉米科学1999，7，1： | 37 |
| 13 | 利用SSR标记技术检测玉米杂交种纯度显示文摘对玉米子粒DNA提取、SSR扩增片段检测方法等进行了研究,并以4个利用常规种子贮藏蛋白质电泳技术难以鉴定纯度的玉米杂交种及相应自交系和9对玉米SSR位点引物为材料,分别筛选出适合这些不同杂交种纯度鉴定的SSR位点引物,建立了一套利用SSR标记进行玉米杂交种纯度鉴定的技术规程。该程序包括从粉碎干种子提取DNA和利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离SSR扩增片段,对仪器设备要求较低、简单、快速,易于推广。 | 李汝玉 李群 谭振馨 颜廷进 张文兰 宋国安 侯淑贞 | 2005 | 玉米科学2005，13，1： | 34 |
| 14 | 利用SSR标记进行玉米品种一致性检测研究显示文摘为了评估SSR标记在玉米品种一致性鉴定中的应用价值及确定基于SSR标记的玉米一致性鉴定标准,利用13个SSR标记对213份来自2004年国家区域试验的玉米单交种(包括16份重复材料)进行了一致性分析,每个品种取20个个体,除在染色体6和8上各选取了2个和3个标记外,其他染色体上均各选取1个SSR标记。结果显示:一致性检测中异型带的类型有7种,每种出现的概率不同;不同品种在不同引物位点的一致性分布情况差别较大。比较位于同一染色体的引物一致性检测结果,发现在相同染色体上位置较近的不同引物一致性检测结果具有较高的相关性,因此提出在选用一致性检测的引物时应遵循均匀分布的原则,减少引物间的相关性。通过剔除自交个体对品种一致性比率进行校正(仅有7个品种),校正值可反映品种真实的遗传一致性和稳定性。综合考虑品种在单个引物位点的一致性和在所有位点的平均一致性,提出了划分玉米品种一致性级别的标准。 | 王凤格 赵久然 戴景瑞 王璐 易红梅 郭景伦 孙世贤 廖琴 杨国航 | 2007 | 分子植物育种2007，5，1： | 29 |
| 15 | 玉米单粒和单叶片DNA快速提取及SSR标记分析显示文摘优化建立了玉米单粒种子胚和单叶片基因组DNA快速提取方法。琼脂糖凝胶检测结果表明,提取的DNA主带清晰,无降解现象,质量好,可以满足SSR-PCR分析的需要。结合采用SSR分子标记技术,此DNA提取方法可有效地用于玉米种子纯度检验和分子标记辅助育种。 | 高文伟 李晓辉 李新海 | 2004 | 玉米科学2004，12，2： | 26 |
| 16 | 一种从干种子提取DNA用于RAPD和SSR分析的简便方法显示文摘用水稻、玉米、棉花和油菜的干种子作材料进行了分离DNA的试验。试验结果表明,从4种作物的干种子中都能分离到质量较好的DNA,得到的DNA可以用于RAPD和SSR分析。这一方法最显著的特点是充分利用了DNA分离的原理,只保留了细胞裂解、DNA沉淀和溶解等关键步骤,而省略了一些诸如去除蛋白质及有机物的中间步骤,因而具有简便、快速等优点,特别适合于一些需要快速得到研究结果的分析,如种子纯度鉴定、分子标记辅助选择等。 | 沙爱华 张端品 | 2005 | 华中农业大学学报2005，24，6： | 24 |
| 17 | 引物组合法在利用DNA指纹鉴定玉米自交系真伪中的应用研究显示文摘利用RAPD分子标记方法对我国 4 6个骨干玉米自交系进行了鉴定研究 ,结果表明 ,仅用A6 ,C6 ,D2 ,F10 ,H19,N19等 6个引物的指纹组合即可将这 4 6个自交系相互区分开来 ,不需要针对每个自交系筛选特异性标记 ,克服了利用特异性标记鉴定玉米自交系的局限性 ;研究出基于WINDOWS98操作平台的玉米DNA指纹数据库和指纹分析软件。并且该数据库和分析软件对自交系的数量和引物数量都是开放性的 ,如果要区分开m个自交系 ,最多只用n个引物即可 ,二者的关系是 :2 n≥m。 | 郭景伦 赵久然 孔艳芳 尉德铭 卢柏山 王元东 | 2000 | 华北农学报2000，15，2： | 24 |
| 18 | SSR鉴定SC704玉米亲本及杂交种纯度的研究显示文摘从30对SSR随机引物中筛选确定了能够清楚、稳定、准确的鉴别SC704亲本和杂交种的2对引物。用引物之一phi053对人为混杂有SC704亲本的杂交种进行纯度鉴定,结果准确无误。探讨并建立了一套应用分子标记SSR技术鉴定SC704玉米亲本及杂交种纯度的方法。与田间种植鉴定相比较,SSR技术用于检验玉米品种的纯度是可靠可行的。 | 刘龙洲 赵久燃 曲延英 王风格 | 2003 | 西北农业学报2003，12，4： | 24 |
| 19 | 应用SSR标记技术鉴定登海11号玉米杂交种纯度的研究显示文摘以登海 1 1号玉米杂交种及其亲本和 9对玉米 SSR位点引物为材料 ,筛选出了适合该杂交种纯度鉴定的 SSR位点引物 ;并对利用幼苗和干种子为材料提取 DNA的效果进行了比较 ,建立了一套利用 SSR标记技术进行玉米杂交种纯度鉴定的技术规程。该操作程序简单、快速、对仪器设备要求较低 ,易于推广。 | 李群 李汝玉 颜廷进 谭振新 | 2004 | 种子2004，23，10： | 21 |
| 20 | 利用杂交玉米F_1代种子果皮组织鉴定母本真实性的SSR研究显示文摘玉米子粒的果皮是全部继承母本遗传信息的F1代组织1。将玉米F1代种子的果皮分离并从中提取DNA,以160对SSR引物为基础对本单位自育和生产上大面积推广的5个玉米单交种及双亲进行特异引物的筛选。特异引物的标准是能同时区分双亲及杂交种。用这些特异引物对杂交种、亲本和从杂交种上分离的果皮DNA进行PCR扩增。实验表明,果皮中的DNA利用SSR分析,具有与杂交种母本完全相同的DNA指纹。可通过杂交种种子获得其母本的全套DNA及其DNA指纹图谱。在亲子鉴定、自交系DNA指纹库建立及品种权保护等方面具有应用前景。 | 赵久然 刘龙洲 王凤格 郭景伦 王元东 | 2004 | 玉米科学2004，12，3： | 21 |
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