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| 1 | 我国PRRS诊断技术与疫苗研究进展显示文摘猪繁殖与呼吸综合征是目前危害世界养猪业最严重传染病之一,并在我国广泛流行,已经造成严重经济损失。近10年来,我国对该病诊断和疫苗进行了大量研究,并取得了重要进展。本文系统概述了我国研究的该病ELISA、RT-PCR、免疫过氧化物酶单层细胞试验、低密度基因芯片、彩色免疫金银染色法和乳胶凝集试验等诊断技术的基本特性,综述了该病灭活疫苗、活疫苗、活载体疫苗和基因疫苗研究的主要进展,并提出我国必须继续加快该病研究,寻求快速、准确、特异的诊断方法和安全高效的疫苗。 | 蔡宝祥 姜平 | 2007 | 畜牧与兽医2007，39，8： | 26 |
| 2 | 荧光定量PCR技术及其应用研究进展显示文摘荧光定量PCR是近年发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量PCR的核心。荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围。论文综述了FQ-PCR技术的原理、FQ-PCR实时定量检测系统及其应用。 | 郭杨 陈世界 郭万柱 李璟 | 2009 | 动物医学进展2009，30，2： | 22 |
| 3 | 欧洲型PRRSV RT-PCR检测方法的建立及ORF7基因序列比较显示文摘根据PRRSV(LV株)ORF7基因设计一对引物,建立了欧洲型PRRSV的RT-PCR检测方法。通过对50份组织病料检测及其ORF7基因序列分析,结果表明,有4份组织病料扩增出欧洲型PRRSV576bp特异性片段,阳性率为8%,其ORF7基因序列和氨基酸推导序列与欧洲型PRRSV弱毒疫苗株(AMER-VAC-PRRS)的同源性分别在99.0%~99.7%和98.5%~100%之间,而与标准毒株(LV)的同源性分别在95.9%~96.6%和96.99,6~97.7%之间。表明该PT-PCR体系适合组织病料中欧洲型PRRSV的直接检测,同时也证实了欧洲型PRRSV在我国的存在,并且与疫苗株之间具有较高的同源性。 | 张战峰 李肖梁 张莹 查云侠 方维焕 | 2007 | 动物医学进展2007，28，5： | 13 |
| 4 | PRRSV与PCV2体外共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫学功能的影响显示文摘制备猪肺泡巨噬细胞,分别接种PCV2、PRRSV、PCV2+PRRSV(先接种PCV2,12h后接种PRRSV)、PRRSV+PCV2(先接种PRRSV,12h后接种PCV2)、PRRSV/PCV2(同时接种)和对照组。接种后不同时间观察细胞病变(CPE),并用real-time PCR和IFA方法检测PRRSV和PCV2滴度,INF-α、INF-γ、TNF-α、IL-8和IL-10的mRNA。结果为:①PRRSV能在PAM中增殖,有CPE;PCV2在PAM中感染率较低,无CPE。②PRRSV对PCV2增殖无明显影响。PCV2先于或同时与PRRSV感染对PRRSV的复制具有抑制作用,而PCV2后于PPRSV感染,可促进PRRSV增殖。③PCV2单独感染PAM后能促进INF-α、INF-γ、IL-8和IL-10的大量表达,对TNF-α的表达量影响不大。④PCV2与PRRSV混合感染,尤其是PCV2后于PRRSV感染后,TNF-α、IL-8和IL-10的表达量与单感染组相比明显增加,而INF-γ的表达量明显受到抑制。实验结果表明,PCV2感染时间对PRRSV的增殖影响不同,PRRSV感染后如果再感染PCV2,可以明显促进PRRSV病毒增殖;两种病毒共同刺激了TNF-α、IL-8和IL-10的大量表达,抑制了抗病毒因子INF-γ的表达,从而可能抑制体液免疫和细胞免疫,加重了病理学免疫应答。 | 冯志新 姜平 王先炜 李玉峰 | 2007 | 中国预防兽医学报2007，29，12： | 12 |
| 5 | TaqMan-MGB荧光定量聚合酶链反应检测水痘-带状疱疹病毒显示文摘目的利用TaqMan-MGB探针技术,建立水痘-带状疱疹病毒(VZV)的荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法,用于临床标本VZV的检测。方法从GenBank上下载几十株VZV基因组序列,在IE62基因的保守区域设计引物与TaqMan-MGB探针,并对反应条件和体系进行优化,同时评价建立检测体系的特异性、敏感性和重复性;利用已知拷贝数的质粒标准品的病毒脱氧核糖核酸(DNA),建立了VZV基因拷贝数定量分析模型。结果该方法与引起相似发病症状的肠道病毒71型,柯萨奇病毒A、B组以及腺病毒均无交叉反应,具有很高的特异性,且灵敏度达到102拷贝,优于常规PCR方法。采用该法对8份疑似水痘、带状疱疹患者疱疹液标本检测均为阳性,较病毒分离、常规PCR法更为简便、快速、敏感。结论该方法适合临床早期感染病例的确认以及水痘、带状疱疹爆发疫情的应急诊断。 | 史雯 卢亦愚 严菊英 冯燕 茅海燕 徐昌平 | 2007 | 中国计划免疫2007，13，2： | 9 |
| 6 | 高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的研究进展显示文摘目前对猪高致病性蓝耳病在流行病学、免疫学及致病机理、实验室诊断技术、综合防制等方面开展了大量的调查研究,对PRRS的诊断与防制已成为当前国内研究的热点。为了全面了解近年来国内外猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)研究状况,从猪繁殖与呼吸综合征的病原及生物学特性、流行特点、临床表现、病理变化、实验室检测、预防和治疗等方面的研究进展进行了综述。 | 谭诗文 | 2009 | 贵州农业科学2009，37，6： | 9 |
| 7 | 猪繁殖与呼吸综合征诊断方法与疫苗研究进展显示文摘猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种猪传染性疾病,该病能引起母猪的繁殖障碍和新生仔猪呼吸症状,严重影响养猪业的健康发展,因此对该病的研究具有重要意义。近年来,该病在世界范围内的流行和分布日趋广泛,造成世界养猪业严重经济损失,因此受到国内外学者的高度重视,对该病的研究也日益深入,在疫病的诊断方法及防控机制等方面取得了重要进展。文章就近年来PRRS诊断方法及疫苗的发展两方面进行了综述。 | 郎广平 郭敏 韩盈盈 冯娇 李彬 付云云 单悦 高英杰 | 2013 | 中国畜牧兽医2013，40，6： | 5 |
| 8 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立显示文摘根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株和经典毒株的序列差异,分别设计了1对特异性鉴别引物和1条TaqMan探针,建立了检测PRRSV变异株的荧光定量RT-PCR方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验。结果表明,建立的方法可鉴别诊断PRRSV变异株和经典毒株,具有较高的特异性;可以检测相当于1TCID50的病毒模板,比常规RT-PCR方法的灵敏度高100倍;对同一样品进行4次重复试验,变异系数(CV)<10%,具有较好的重复性。应用建立的荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR对13份PRRS疑似病例肺组织进行平行检测,结果荧光定量RT-PCR检出11份阳性,高于常规RT-PCR方法。本研究建立的荧光定量RT-PCR方法能检测高致病性PRRSV变异株,不仅特异性好、灵敏度高,而且快速简便,可用于变异PRRSV的临床诊断和流行病学调查。 | 高诗敏 王敏功 邓瑞林 姚晓辉 王林川 | 2011 | 中国兽医科学2011，41，3： | 4 |
| 9 | 高致病性PRRSV Nsp2变异株Power SYBR Green real time RT-PCR检测方法的建立显示文摘根据高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2变异株Nsp2基因保守区的核苷酸序列设计合成了1对引物,建立了Power SYBR Green模式的实时荧光定量RT-PCR方法,用于检测高致病性PRRSV Nsp2变异株。以pMD-Nsp2质粒为阳性对照制作标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果显示,该方法只能检测到高致病性PRRSV Nsp2变异株的特异性扩增信号;检测线性范围广,在模板浓度为3.15×10^9-3.15×10^0copies/μL具有良好的线性关系,相关系数(r^2)为0.998;最低检测限为3.15copies/μL。对25份疑似高致病性PRRS猪病料的检测结果显示,该方法与病毒分离的符合率为100%。表明,建立的Nsp2-Power SYBR Green RT-PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。 | 郭杨 陈世界 林华 郭万柱 徐志文 颜其贵 | 2009 | 中国兽医科学2009，39，5： | 4 |
| 10 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的建立显示文摘针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N基因保守序列设计引物与TaqMan探针,在建立常规PCR的基础上,设计并优化了TaqMan荧光定量PCR方法用于PRRSV核酸的检测。应用新建立的荧光定量PCR方法检测其它主要猪病病原,无任何非特异性反应;针对PRRSV阳性克隆质粒的检测灵敏度可以达到1.2×101copy/ml,比常规PCR高100倍;通过对48份临床疑似样本的检测表明有29份样本为PRRSV阳性,与巢式PCR检测结果一致,而常规PCR只能检出其中19份阳性样本,灵敏度优于常规PCR方法。结果表明,试验建立的PRRSV TaqMan荧光定量PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为PRRSV临床诊断提供一个更为有效的方法。 | 徐辉 方立 陈伟杰 赵灵燕 倪柏锋 方维焕 | 2008 | 浙江农业学报2008，20，5： | 4 |
| 11 | M蛋白基因shRNA抑制PRRSV在Marc145细胞中复制的研究显示文摘【目的】通过靶向PRRSV基因组中的M基因的siRNA来抑制PRRSV在Marc145细胞中的复制。【方法】构建4个能转录小发夹RNA(shRNA)的质粒,将其与靶蛋白表达质粒共转染HEK293A细胞,观察荧光或进行半定量PCR;或将其转染Marc145细胞,感染PRRSV后进行IFA、TCID50和实时PCR检测。【结果】shRNA表达质粒对M融合蛋白表达的抑制率约为50%,使M真核质粒表达蛋白的mRNA水平降低54%~64%,表达的shRNA在PRRSV感染后48h使病毒的TCID50和mRNA水平均降低到1/10~1/100倍,间接免疫荧光结果表明shRNA表达质粒转染孔的荧光细胞数显著减少。【结论】shRNA表达质粒特异性的抑制了靶蛋白M和PRRSV的复制,靶向PRRSV基因组M基因不同区域的siRNA可以作为控制该病毒传播的候选策略。 | 黄娟 姜平 李玉峰 蒋文明 | 2008 | 中国农业科学2008，41，1： | 4 |
| 12 | 高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)病毒含量荧光定量PCR方法的建立显示文摘为快速、准确测定高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)活疫苗(JXA1-R株)的病毒含量,根据GenBank中该病毒的保守基因序列设计合成了引物和探针,优化反应条件,建立了其活疫苗病毒含量的荧光定量PCR方法。用该方法测定疫苗样品的病毒含量,每头份稀释100倍后,Ct均值为17.08,病毒拷贝数均值为4.61×107copy/μL。将建立的荧光定量PCR与传统的TCID50方法进行相关性分析,相关系数r=0.83,表明该方法可用于HP-PRRS活疫苗半成品及成品的病毒含量测定。 | 魏津 蒋卉 戴志红 关孚时 李翠 张秀英 温芳 陆连寿 王在时 | 2013 | 中国兽药杂志2013，47，10： | 3 |
| 13 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR检测方法的建立显示文摘根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5'端非编码区基因序列,设计合成了1对特异性引物,参考本实验室针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白设计的引物,经过PCR反应条件的优化,建立了BVDV和PRRSV双重RT-PCR的检测方法。对于PRRSV和BVDV的cDNA最低检测量分别为3.8×10-4 ng和7×10-4 ng,对于猪瘟病毒(CFSV)、脑心肌炎病毒(EMCV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的PCR扩增结果均为阴性;用该方法对江苏省不同地区采集的75份仔猪的肺脏、脾脏和淋巴结等病料进行了检测,结果PRRSV有55份阳性,BVDV有14份阳性,PRRSV和BVDV混合感染的有12份,与PRRSV和BVDV单一RT-PCR的检测结果符合率分别为89.3%和92%。证明建立的双重RT-PCR检测方法可用于临床样品中BVDV和PRRSV的检测。 | 王克伟 李玉峰 王先炜 马涛 张国龙 姜平 | 2011 | 畜牧与兽医2011，43，1： | 3 |
| 14 | 猪脑心肌炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二重RT-PCR检测方法的建立显示文摘根据猪脑心肌炎病毒(EMCV)3D基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因序列设计合成了两对特异性引物,经过PCR反应条件的优化,建立了EMCV和PRRSV二重RT-PCR方法,其PCR产物大小分别为286 bp和390 bp,并具有EMCV和PRRSV特征序列。该方法对EMCV和PRRSV的最低检测量分别为10×TC ID50和1×TC ID50;而对乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒的PCR检测结果均为阴性;20份临床发病仔猪样品检测结果为PRRSV阳性者15份,EMCV阳性者3份,证明我国存在EMCV感染。该方法敏感、特异,可用于EMCV和PRRSV感染的检测。 | 白娟 李广明 宋勤叶 李玉峰 王先炜 张国龙 姜平 | 2009 | 畜牧与兽医2009，41，6： | 2 |
| 15 | 实时荧光定量PCR在猪繁殖与呼吸综合征病毒研究中的应用显示文摘猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种严重危害种公猪和繁殖母猪及其仔猪的一种接触性传染病,是我国重要猪病病原体之一。建立一种快速、可靠的诊断方法,对于控制和消灭PRRSV至关重要。实时荧光定量PCR技术的发展为PRRSV在快速检测和鉴别诊断方面开辟了新思路。以下回顾了实时荧光定量PCR操作技术在PRRSV研究应用方面的研究进展,同时提出了该领域目前面临的问题,并对其未来发展方向进行了展望。 | 祝秀梅 刘学荣 牟克斌 | 2010 | 生物技术通报2010，26，8： | 2 |
| 16 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及单克隆抗体制备显示文摘目的获得原核表达的PRRSV N蛋白,并制备N蛋白的单克隆抗体。方法将已构建的含有PRRSV N蛋白基因的重组表达载体阳性菌,在37℃条件下,用终浓度1 mmol/L的IPTG诱导表达4 h。经SDS-PAGE分析,表明N基因在大肠杆菌中得到了高效表达。经镍柱亲和层析纯化,以此蛋白作为抗原采用长程免疫法免疫Balb/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合。结果获得了纯度较高、免疫学活性较好的N蛋白,细胞融合率为81.3%。建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体。初检阳性率为17.3%,经2次亚克隆反复筛选获得了2株分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为4G10和2F9。ELISA证实所获得的单抗是特异性针对PRRSV共同的抗原表位,4G10和2F9经反复冻存、复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体。结论成功制备出高效价的抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体,为建立一种快速、特异的PRRSV检测方法奠定了基础。 | 吴胜昔 邵烈刚 曾政 陈晶 刘人菊 袁丽萍 熊仲良 蔡家利 | 2013 | 免疫学杂志2013，29，10： | 1 |
| 17 | 美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立显示文摘根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株的基因序列,设计U1和U6两套PCR引物和荧光探针,建立了扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR用于检测美洲型PRRSV。用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA、RNA进行扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟(HCV)、猪伪狂犬(PRV)等7种病毒进行特异性检测。结果显示建立的扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR可用于检测PRRSV,其灵敏度为10个拷贝的质粒DNA,而与HCV等非PRRSV无交叉反应。本研究所建立的荧光RT-PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可用于PRRSV样品的检测。 | 鲁韦韦 唐泰山 张常印 王凯民 姜平 | 2008 | 中国预防兽医学报2008，30，5： | 1 |
| 18 | 猪繁殖与呼吸系统综合征诊断方法概述显示文摘猪繁殖与呼吸系统综合征目前广泛流行于欧美及亚洲国家,已给世界养猪业造成严重的经济损失.已成为全球规模化猪场的主要疫病之一.猪繁殖与呼吸综合征的诊断、预防和控制一直是养猪生产国家所面临的艰巨任务,即使在养猪业发达的美国及西欧国家,也是一大难题.因此,建立有效且实用的猪繁殖与呼吸系统综合征诊断和防治技术是预防和控制猪繁殖与呼吸系统综合征流行的一个重要环节. 本文就该病的诊断和防治技术在近几年的研究作一综述,以供参考. | 木兰 曹立坤 | 2017 | 农家科技(理论版)2017，，8： | 0 |
| 19 | 猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA诊断试剂比对分析显示文摘笔者选择国内3个厂家生产的抗体ELISA检测试剂盒,编号为A、B、C,对360份免疫过猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征疫苗血清样本进行检测,以武汉科前动物生物制品有限责任公司的猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征ELSIA诊断试剂为标准。结果 360份血清样本中,其中猪瘟218份阳性,142份为阴性。A、B、C 3个厂家试剂与标准结果比较,猪瘟总符合率分别为63.89%、68.33%和55.56%,猪繁殖与呼吸综合征总符合率分别为56.67%、80%、65.56%,B试剂的总符合率最高分别为68.33%和80%。检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体B厂家的试剂是较理想的诊断试剂。 | 汪忠荣 赵孝木 莫兴虎 杨先富 袁晓娟 廖飞 | 2015 | 当代畜牧2015，44，2Z： | 0 |
| 20 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒检测技术研究进展显示文摘猪繁殖与呼吸综合征是一种能引起母猪繁殖障碍、新生仔猪呼吸道症状及高病死率的传染病。文章就其检测技术,如病毒分离,抗原检测,血清抗体检测,免疫胶体金技术的研究进展做一综述。 | 王劭 胡奇林 程晓霞 林锋强 欧阳岁东 朱小丽 | 2006 | 动物医学进展2006，27，z1： | 0 |
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