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M蛋白基因shRNA抑制PRRSV在Marc145细胞中复制的研究

查看全文 作　　者：[1]黄娟 [1]姜平索引[1]李玉峰索引[1]蒋文明 高影响力作者 机构地区：[1]南京农业大学动物医学院脓业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京210095高影响力机构 出　　处：《中国农业科学》索引2008年第41卷第1期,共6页高影响力期刊 基　　金：国家自然科学基金(30471288、30270990);江苏省自然科学基金(BK2005093);教育部博士点基金项目(20030307012) 摘　　要：【目的】通过靶向PRRSV基因组中的M基因的siRNA来抑制PRRSV在Marc145细胞中的复制。【方法】构建4个能转录小发夹RNA(shRNA)的质粒,将其与靶蛋白表达质粒共转染HEK293A细胞,观察荧光或进行半定量PCR;或将其转染Marc145细胞,感染PRRSV后进行IFA、TCID50和实时PCR检测。【结果】shRNA表达质粒对M融合蛋白表达的抑制率约为50%,使M真核质粒表达蛋白的mRNA水平降低54%~64%,表达的shRNA在PRRSV感染后48h使病毒的TCID50和mRNA水平均降低到1/10~1/100倍,间接免疫荧光结果表明shRNA表达质粒转染孔的荧光细胞数显著减少。【结论】shRNA表达质粒特异性的抑制了靶蛋白M和PRRSV的复制,靶向PRRSV基因组M基因不同区域的siRNA可以作为控制该病毒传播的候选策略。 关 键 词：PRRSV RNA干扰 M蛋白基因
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