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| 1 | 变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立与初步应用显示文摘参照GenBank的变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与普通PRRSV的Nsp2段基因序列,设计并合成1对引物和TaqMan探针。通过对反应条件优化,标准质粒构建,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR诊断变异型PRRSV方法。结果表明,该方法具有特异性强,敏感性高等特点,能够检测出264个拷贝数的标准质粒品,0.562 3TICD50的病毒量,比RT-PCR敏感10倍。对22份病料样品进行检测,结果有8份为阳性,阳性率为36.4%。由于该方法具有定量、快速、准确、敏感等优点,适用于对猪群感染变异型猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)早、中、晚期的诊断,对有效诊断及防治高致病性PRRS的发生起到重要作用。 | 周伦江 王隆柏 方桂友 魏宏 车勇良 陈如敬 庄向生 | 2010 | 中国兽医学报2010，30，8： | 4 |
| 2 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR-DHPLC检测新技术的建立及应用显示文摘应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),根据PRRSV GP5基因的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。以猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪流感病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性和重复性;对阳性标准品的检测结果表明,所建立的PCR-DHPLC法灵敏度可达1.0×101拷贝/μL。对16份疑似病料分别应用本试验所建立的PCR-DHPLC法与SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法、病毒培养法进行检测,发现有15份荧光定量PCR阳性,15份PCR-DHPLC阳性,12份PCR-凝胶电泳阳性。结果表明,建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。 | 杨春华 祝建新 钟毅 孙思扬 沈艳 陈庆富 王川庆 | 2012 | 中国兽医学报2012，32，2： | 3 |
| 3 | 牛病毒性腹泻病毒实时定量RT-PCR检测技术的建立及初步应用显示文摘以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的保守基因5'-非编码区为参考,设计、优化一对特异的荧光定量PCR引物,应用Smart CycleⅡ分析系统,结合Eva Green荧光染料结合原理,建立一种快速、定量检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范围为101~106copies/μL,相关系数为R2=0.997,扩增效率为E=0.78。灵敏性比常规PCR高102倍。该方法具有良好的特异性,检测变异系数低于1%。应用本实验建立的方法检测25份不同地区采集的临床症状疑似BVDV感染的牛粪样品,阳性检出率为72%(18/25),与病毒分离培养和电检观察相比,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点,为实验室快速、准确检测BVDV奠定了基础。 | 任艳 陈创夫 乔军 王鹏雁 盛金良 王远志 张沾 李臻 | 2010 | 畜牧兽医杂志2010，29，5： | 3 |
| 4 | 实时荧光定量PCR技术及在猪重大疫病中的诊断应用显示文摘实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、快速高效、全封闭反应、高通量等特点。随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医诊断研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用。文章对FQ-PCR的原理、分类以及在猪重大疫病的诊断应用进行了综述。 | 周斌 | 2011 | 猪业科学2011，28，8： | 0 |
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