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| 1 | 利用改良的CTAB法提取棉花叶片总RNA显示文摘 | 胡根海 喻树迅 | 2007 | 棉花学报2007，19，1： | 94 |
| 2 | 油茶种子EST文库构建及主要表达基因的分析显示文摘为研究油茶种子在油脂转化高峰期的基因表达并分离克隆与油脂合成等有关的重要基因,以油茶优良无性系湘林1号和湘林4号近成熟种子为材料构建cDNA文库;随机挑取2327个克隆进行3′端测序构建EST文库。将数据完整并无X、N的1979条cDNA序列与NCBI核酸数据库的非冗余序列进行同源性比较,确认763条cDNA序列与核酸数据库中其他物种的DNA序列具有很高或较高的同源性,可确认266种基因;有1216个克隆序列为未知功能的基因序列。各类基因表现出不同的表达丰度,其中贮藏蛋白基因、与基因表达调控相关的基因、抗逆相关基因、种子成熟和胚胎发育相关的基因等为高丰度表达,与脂肪酸代谢相关的基因等为中丰度表达,另外还有大量的其他基因和未知功能基因在种子中表达。各类基因表达的数量和趋势与种子接近发育成熟阶段相吻合。 | 谭晓风 胡芳名 谢禄山 石明旺 张党权 乌云塔娜 | 2006 | 林业科学2006，42，1： | 59 |
| 3 | 一个新的白血病相关基因LRP16全长cDNA的克隆、序列分析及表达特征显示文摘克隆一个与白血病复发相关基因 (LRP1 6)的全长 c DNA序列 ,对其进行染色体定位、组织表达谱分析 ,并对该基因编码蛋白质进行原核表达 .首先用获得的一段 3kb DNA片段在 NCBI提供的 h ESTs数据库中进行电子杂交并对重叠克隆片段组装 ,再设计引物进行 c DNA末端快速扩增(RACE技术 ) .采用 Northern印迹方法进行组织表达分析 .以高通量基因组序列 (HTGS)数据库为基础进行染色体定位 .对构建的克隆菌用 IPTG诱导重组蛋白表达后进行 SDS- PAGE,同时对重组体测序确证 .钓取了该基因全长 c DNA、推导所编码的氨基酸序列 ,并将该基因定位于染色体1 1 q1 2 .2 .原核表达筛选获得了该基因重组子的一个缺失体 .对 LRP1 6基因全长 c DNA的序列分析提示 ,该基因可能编码两种 N端不同的蛋白质 ,且该基因的转录本可能存在一种丰度较低的剪接体 . | 韩为东 于力 楼方定 王全顺 赵瑜 史子江 焦宏远 周建军 | 2001 | 中国生物化学与分子生物学报2001，17，2： | 60 |
| 4 | 油茶种子cDNA文库的构建显示文摘 以湘林1号和湘林4号油茶优良无性系近成熟种子为材料,采用裂解法和改良的CTAB法提取总RAN;用磁珠法分离得到纯化的mRNA;在反转录酶和其他酶的作用下合成一链cDNA和二链cDNA;经与质料载体重组和转化大肠杆菌,成功地构建了世界上第一个油茶种子cDNA文库.经检测,文库存容量达106,重组率为88.21%.测序结果表明:克隆片段长度一般都大于600bp,说明构建的文库质量较高,能够满足ESTs文库构建及从文库中分离筛选重要基因等研究工作的需要,为进一步研究奠定了很好的物质和技术基础. | 胡芳名 谭晓风 石明旺 乌云塔娜 | 2004 | 中南林学院学报2004，24，5： | 44 |
| 5 | 小金海棠总RNA提取方法比较及cDNA的LD-PCR扩增显示文摘用CTAB和SDS-酚两种方法提取了小金海棠根的总RNA,以CTAB法提取的总RNA为模板,用长距离PCR(LD-PCR)的方法合成了双链cDNA并进行了扩增。结果表明,CTAB法比SDS-酚法提取的总RNA纯度高、完整性好,宜于进行RT-PCR和cDNA文库的构建,SDS-酚法操作简单易行,提取产物可以直接用于转膜进行Northern杂交。 | 张玉刚 成建红 韩振海 许雪峰 李天忠 | 2005 | 生物技术通报2005，21，4： | 49 |
| 6 | 中国不同地区蛇床的rDNA ITS序列分析显示文摘目的:探讨不同分布区的蛇床Cnidium monnieri 的ITS序列变异与其地理分布和化学成分的相关性。方法:设计2 对引物,Pf+ Pb 及P5-8SITS1+ P5-8SITS2 ,PCR扩增产物纯化后用银染法或ABI310 测序。结果:得到核糖体DNA中的ITS及5-8SrDNA 完全序列,18S和26SrDNA 部分序列,共约700 bp 。5 个地点样品的ITS1及ITS2 的序列大小分别为210~217 bp 和219 ~224 bp。ITS1 碱基序列的遗传距离0-00 ~1-93% ,ITS2 碱基序列的遗传距离0-46 ~2-34% ,ITS1 较为保守。以NJ法根据ITS2 序列数据重建系统发生树。哈尔滨样品聚为一组,衡水与德州样品和郑州与高淳样品各自聚为一组。结论:ITS2 序列的变异与中国产蛇床的纬度分布相关,而其与蛇床化学型的关系尚需作进一步研究。 | 蔡金娜 周开亚 徐珞珊 王峥涛 沈曦 王义权 李晓波 | 2000 | 药学学报2000，35，1： | 47 |
| 7 | 粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)的cDNA克隆及序列分析显示文摘目的获得我国广州地区粉尘螨 类变应原 (Der f ) c DNA片段 ,为构建 DNA疫苗或表达重组蛋白打下基础。方法挑取经选择鉴定的活粉尘螨 ,提取总 RNA,采用 RT- PCR的方法扩增 Der f 片断 ,进行克隆、测序和分析。结果获得长度为 6 32个碱基对的核苷酸片断 ,序列分析结果和 Genebank上去除内含子后的基因序列 (em b| X6 5 196 .1| )同源性为99% ,其中有 6个碱基不同 ,推导的编码氨基酸序列同源性为 10 0 %。结论我们首次获得广州地区的 Der f 的 c DNA克隆 ,该克隆 c DNA序列与 Genebank上已公布的 Der f 序列高度同源。 | 郝敏麒 徐军 钟南山 | 2001 | 免疫学杂志2001，17，3： | 45 |
| 8 | 三个品种家鸡催乳素基因cDNA的克隆及序列分析显示文摘从粤黄鸡、丝毛乌骨鸡及伊莎蛋鸡的垂体中快速抽提总RNA,根据国外已发表的肉用仔鸡催乳素基因cDNA的序列,设计并合成了能与特定载体末端互补的1对引物,经反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段与线性化质粒 pBSSK连接,克隆后进行序列分析,与已报道的肉用仔鸡、矮脚鸡和火鸡催乳素基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行了比较。结果表明,不同品种间核苷酸同源性介于93.97%~99.87%之间,其中丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高,为99.87%。推导的相应氨基酸序列的同源性在98.25%~100%之间,也是丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高,为100%。在粤黄鸡、丝毛乌骨鸡和伊莎蛋鸡中,发现前两者的催乳素前体的cDNA片段推导的氨基酸序列中信号肽裂解位点跟肉用仔鸡、矮脚鸡及火鸡的一样,为 Leu-Pro-Ile-Cys,而伊莎蛋鸡的信号肽裂解位点则不一样,为Pro-Pro-Ile-Cys。此位点的差异可能导致催乳素前体翻译加工的不同,使伊莎蛋鸡无就巢性。这3个家鸡品种与国外的肉用仔鸡、矮脚鸡催乳素氨基酸序列还在以下位置出现差异:71、141、150、175。在肉用仔鸡、丝毛乌骨鸡? | 周敏 张细权 施振旦 曹永长 | 2001 | Acta Genetica Sinica2001，28，7： | 41 |
| 9 | 中国人庚型肝炎病毒(HGV)部分基因的克隆和cDNA序列测定显示文摘中国人庚型肝炎病毒(HGV)部分基因的克隆和cDNA序列测定周育森王海涛唐时幸王竟陈薇赵秋敏张习坦军事医学科学院微生物学流行病学研究所北京100071在急、慢性输血后肝炎、散发性肝炎及暴发性肝炎中,有相当比例的病人用现有甲、乙、丙、丁、戊型肝炎的诊断... | 周育森 王海涛 唐时幸 王竟 陈薇 赵秋敏 张习坦 | 1996 | 军事医学科学院院刊1996，20，2： | 37 |
| 10 | 人食管癌相关基因cDNA片段的克隆与初步鉴定显示文摘目的分离人原发性食管组织中新的相关基因,揭示食管癌的易感性与癌变原理。方法用高效、灵敏的mRNA差异显示技术,以2例正常食管上皮、1例癌旁上皮、2例高癌家族的食管癌组织互为对照,通过对其基因表达的比较,找出差异条带,进行RTPCR鉴定和DNA序列分析。结果(1)在实验中,分离、鉴定了18个差异片段,其中包括正常组织表达而肿瘤不表达的正常食管基因(normalesophagealgene,NEG)13个,肿瘤表达而正常组织不表达的突变食管基因(mutatedesophagealgene,MEG)5个。(2)4个NEG片段在GenBank数据库中没有发现同源的已知基因或片段,将其分别命名为食管癌相关基因1~4(esophagealcancerrelatedgene,ECRG1~4)。(3)其他14个cDNA片段分别与GenBank中的12个已知基因或片段同源,这些基因在食管癌中的作用还有待于进一步研究。(4)通过RTPCR鉴定,已初步证明上述4个ECRG片段在正常食管上皮组织和食管癌中的表达有差异。(5)通过对7个人正常组织的cDNA文库检测表明,这4个ECRG片段在胎脑、成人脑、肝、肾、睾丸、骨髓及骨胳肌? | 苏涛 刘海玲 陆士新 赵新吉 周春晓 金顺钱 | 1998 | 中华肿瘤杂志1998，20，4： | 39 |
| 11 | 水稻葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA的电子克隆显示文摘电子克隆是基因克隆的新策略。以小麦胞质葡萄糖 6 磷酸脱氢酶cDNA (Tagpdl克隆 )序列为信息探针 ,在GenBank水稻nr数据库中找到高度同源的水稻基因组序列 ,通过人工序列拼接及RT PCR确认得到了水稻该基因的全长cDNA序列 ,命名为OsG6PDH。OsG6PDH与小麦Tagpdl克隆的DNA一致率为 88% ,推导的氨基酸序列与小麦、番茄、烟草的胞质葡萄糖 6 磷酸脱氢酶基因的一致率分别为 89%、79%、80 %。经RT PCR表达谱分析 ,OsG6PDH在水稻幼穗、胚、根、叶中都有表达 ,在幼穗与根中表达略高。另外 。 | 黄骥 王建飞 张红生 曹雅君 林长发 王东 杨金水 | 2002 | Acta Genetica Sinica2002，29，11： | 35 |
| 12 | 中国人庚型肝炎病毒全基因cDNA克隆及序列测定显示文摘首次报道了中国人庚型肝炎病毒(HGV)全基因cDNA的克隆及序列测定。中国庚型肝炎病毒(HGVC964)基因全长为9128个核苷酸,编码一个长度为2870个氨基酸残基的多聚前体蛋白。5端有一个367bp的非翻译区,3端长度为147个核苷酸。基因组中G+C占59.93%。该株病毒(HGVC964)与国外报道的3株HGV序列比较,核苷酸同源性为84.0%~89.9%,氨基酸同源性均大于91%。 | 周育森 陈薇 赵秋敏 赵惠柳 张京生 徐静 王海涛 | 1996 | 军事医学科学院院刊1996，20，4： | 33 |
| 13 | 肝再生增强因子的cDNA克隆、表达及表达产物的生物活性研究显示文摘以肝部分切除后再生肝组织为起始材料,利用RT-PCR扩增出大鼠肝再生增强因子(ALR),亚克隆于pGEM-T载体,核苷酸序列测定证实为大鼠ALR;将ALRcDNA亚克隆于pBV220质粒,构建了原核表达栽体,并获高效表达菌株,特异表达蛋白占细菌总蛋白的15%,原核表达的ALR在体外缺乏促进大鼠原代培养肝细胞及SMMC-7721肝癌细胞DNA合成的活性,但在体内1/3肝部分切除模型中可刺激肝细胞DNA合成;ALR在生物学活性方面与肝脏刺激物(HSS)存在一定差别,ALR和HSS应是两种不同的活性因子.ALR还具有促肝损伤修复的作用,对其深入研究可能为临床治疗严重肝病提供有效的药物. | 杨晓明 谢玲 邱兆华 宫锋 吴祖泽 贺福初 | 1997 | 生物化学杂志1997，13，2： | 32 |
| 14 | 重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序显示文摘蛋白激酶CK2是一种存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.它是由两个催化亚基(α或α′)和两个调节亚基(β)组成的不均一四聚体.用反转录PCR从HL-60细胞中获得了人蛋白激酶CK2β亚基编码区cDNA,将NdeⅠ/HindⅢ双酶切PCR产物连接到表达载体pT7-7的NdeⅠ/HindⅢ双酶切位点中.转化感受态细菌DH5α获得转化子,阳性筛选率为72%.限制性酶切分析结果表明,插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符.随机挑选4个阳性质粒测定其插入片段DNA序列,结果显示有2个含有正确插入的人蛋白激酶CK2βcDNA,命名为pTCKB.其余2个克隆分别存在1个和2个点突变,即在其编码区condon148的TCA→TTA,结果Ser→Leu;另一个则在Condon143GTG→ATG,Val→Met;Condon170GTG→GCG,Val→Ala.重组质粒(pTCKB)克隆的成功,将为在原核细胞中表达蛋白激酶CK2β亚基以及利用CK2βcDNA作为探针进行深入研究打下基础. | 刘新光 梁念慈 马涧泉 刘文 | 1999 | 中国生物化学与分子生物学报1999，15，2： | 33 |
| 15 | Cytokine-induced killer cells showing multidrug resistance and remaining cytotoxic activity to tumor cells after transfected with mdr1 cDNA显示文摘Background Routine treatment of cancer such as surgery, radiation or chemotherapy is sometimes unable to erdiacate metastatic malignant cells. So we tried a new method and increased the adoptive immunotherapy of Cytokine-induced killer (CIK) cells in tumor patients and the multidrug resistance (mdr1) cDNA was transfected into CIK cells. Methods CIK cells were obtained from peripheral blood and induced by IFN-γ, anti-CD3 monoclonal antibody, IL-2 and IL-1. CIK cells were transfected with plasmid PHaMDR containing human mdr1 cDNA by electroporation. RT-PCR was used to detect mdr1 mRNA in transfected CIK cells. P-glycoprotein (P-gp) expressed on surface of CIK cells was assayed by FITC-conjugated anti-P-gp monoclonal antibody and flow cytometry. Multidrug resistance to doxorubicin and colchicine and cytotoxic activity to human breast cancer cell line MCF7 were performed using MTT method. Results mdr1 mRNA was detected in transfected CIK cells. P-gp was expressed on the surface of the transfected CIK cells, and the P-gp positive cells reached 21%-37% of the total CIK cells after transfection. The IC50 to doxorubicin increased to 22.3-45.8 times, and that to colchicines to 6.7-11.35 times, as compared to those of untransfected CIK cells. However, the cytotoxic activity to MCF7 cell line remained unaltered.Conclusions CIK cells were successfully transfected with mdr1 cDNA by using electroporation. The transfected CIK cells had the characteristics of multidrug resistance without change in their cytotoxic activity to tumor cells. | 李惠芳 杨永红 石永进 王逸群 朱平 | 2004 | Chinese Medical Journal2004，，9： | 29 |
| 16 | 牛催乳素基因组及其cDNA全长序列的分子克隆和分析显示文摘通过LongPCR等技术首次克隆得到全长 9388bp的牛催乳素 (bPRL)基因组序列 (GenBank登录号AF4 2 6 315 ) ,其中包括bPRL基因全部 5个外显子和 4个内含子 ,5′端 85 4bp的上游调控区以及 3′端 6 9bp的UTR。AF4 2 6 315基因编码的蛋白质在GenBank中的序号为AAL2 80 75 ,由 2 2 9个氨基酸残基组成 ,1~ 30位氨基酸残基为信号肽序列 ,成熟的多肽含有 199个氨基酸残基。将bPRL基因组DNA真核表达载体转染COS 7细胞后通过RT PCR得到长度为80 4bp的bPRLcDNA序列 ,该序列涵盖了bPRL基因的全部ORF区 ,证明本研究所获得的bPRL基因组DNA具有转录的生物学功能。Blast搜索结果显示 ,GenBank数据库中收集有多条bPRL基因的mRNA和EST序列 ,各序列间存在多个SNP位点 ,主要分布于下游编码区和 3′端的UTR ,这些位点均未改变相应的氨基酸残基的性质 ,此外 。 | 曹新 王强 颜景斌 阳飞昆 黄淑帧 曾溢滔 | 2002 | Acta Genetica Sinica2002，29，9： | 30 |
| 17 | 一种改进的富含多糖的芒果组织中完整总RNA提取方法显示文摘2次用0.25体积无水乙醇和0.11体积的5mol·L-1醋酸钾溶液(pH4.8)去除多糖,并用硼酸和聚乙烯吡咯烷酮去除多酚,成功地从0.2￣0.3g富含多糖和多酚的芒果嫩绿色、砖红色和转绿期的叶片以及果皮和果肉组织中提取到完整总RNA,所提取的RNA在体外能成功进行反转录合成cDNA。此法的全过程共需要22￣24h。 | 杜中军 徐兵强 黄俊生 王家保 徐立 | 2005 | 植物生理学通讯2005，41，2： | 28 |
| 18 | 半滑舌鳎Dmrt1α基因的cDNA克隆及其表达显示文摘在脊椎动物中,许多基因参与了性腺的分化和性别的决定过程,Doublesex and mab-3-related transcription factor1(Dmrt1)编码了一个具有DM框的转录因子,在哺乳类、鸟类、两栖类、爬行类和鱼类中与雄性性腺的分化和形成有关,是一种目前已知从无脊椎动物到人最保守的性别分化相关基因。半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是近年来新开发的一种理想的增养殖对象,雌性个体生长速度比雄性快2-3倍,为了探索半滑舌鳎的性别决定机理,培育全雌苗种,实现单性养殖,本研究采用同源克隆策略,从半滑舌鳎精巢中获得Dmrt1α cDNA全长1149bp,其中包含777bp的开放阅读框(ORF),45bp长的5’末端非编码区(UTR),327bp长的3’末端UTR。氨基酸序列分析表明半滑舌鳎与其他鱼类Dmrt1基因的氨基酸序列同源性为41.9%-58.1%,与鼠和人的Dmrt1氨基酸序列同源性较低,只有32.6%和33.7%。RT-PCR分析表明,Dmrt1α只在半滑舌鳎的精巢中表达,而在雌、雄鱼的脑、肝脏、脾脏、肾脏、肌肉、皮肤、心肌、肠、头肾、鳃、皮肤、小肠、眼以及雌鱼的卵巢中都不表达。与对照组雄鱼和经过甲基睾酮(Methyltestosterone,MT)浸浴处理和高温处理的雄鱼一样,Dmrt1α也在甲基睾酮(MT)处理和高温诱导的由雌性性反转为雄性的精巢中表达,而未经诱导或诱导不成功的雌鱼中仍没有Dmrt1α表达,这些结果表明Dmrt1α可能参与了半滑舌鳎的雄性性别决定过程。 | 邓思平 陈松林 | 2008 | 中国水产科学2008，15，4： | 27 |
| 19 | 水稻雄性不育与可育花药的mRNA差别显示和cDNA差别片段的分析显示文摘用mRNA差别显示 ,对水稻细胞质雄性不育系、保持系和F1杂种的花药mRNA和叶片mRNA进行了比较和分析 ,以研究雄性不育花药在花粉败育时期的基因表达方式 .花药在不育与可育间显示的cDNA差别带数多于叶片 ,表明在花药中育性基因的表达比叶片中活跃和充分 .不同类型花药的基因转录方式既与花药育性程度有关也与花药败育早晚有关 ,不育、部分不育和早期败育的花药所显示的cDNA差别带数多于可育和晚期败育的花药 .在回收的 1 2个cDNA差别片段中 ,有2个可能与雄性不育相关 ,AB4A5 片段只在不育花药中专一表达 ,另一片段AB3 B2 含有与线粒体基因coxⅡ同源的序列 。 | 王学德 朱英国 | 1998 | 中国科学(C辑)1998，28，3： | 28 |
| 20 | 一个新的水稻C2H2型锌指蛋白cDNA的克隆与序列分析显示文摘 | 黄骥 张红生 曹雅君 王东 王建飞 杨金水 | 2002 | 南京农业大学学报2002，25，2： | 28 |
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