|
|
|
题名
|
作者
|
年代
|
出处
|
被引量
|
| 1 | 乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒反式调节靶基因的抑制性消减杂交和基因芯片分析结果的比较显示文摘目的:筛选与克隆HBV和HCV蛋白反式调节靶基因,阐明HBV和HCV感染后慢性肝脏疾病的发病机制.方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及表达谱基因芯片(cDNAmicroarray)技术筛选并克隆HBV和HCV蛋白反式调节的靶基因.以HBV和HCV蛋白的表达质粒转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.同时进行表达谱基因芯片技术分析.结果:成功构建人HBV和HCV蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库,对HBV和HcV蛋白反式调节的靶基因同时进行基因表达谱芯片的分析.在SSH分析中,文库扩增后均得到200-800bp插入片段.对插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列.对于不同的肝炎病毒蛋白反式调节的靶基因类型,以及不同的分析技术研究的结果进行比较分析,发现了一系列的共同调节的靶基因,说明不同的肝炎病毒蛋白反式调节具有共同的作用途径.结论:筛选到的反式调节靶基因,包括一些与细胞生长调节、信号转导、肿瘤免疫发生及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了HBV和HCV蛋白可能存在的调控机制,有助于阐明HBV和HCV蛋白的反式调节在慢性肝脏疾病的发生发展中的作用. | 成军 刘妍 洪源 王建军 杨倩 王琳 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，2： | 14 |
| 2 | 乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对肝细胞信号转导的影响显示文摘乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染肝细胞之后,肝炎病毒蛋白的表达对与肝细胞中正常的信号转导通路产生显著的影响.肝炎病毒蛋白对于肝细胞信号转导的影响,势必影响肝细胞的细胞周期、细胞凋亡、细胞生长以及细胞的恶性转化等环节.因为这些细胞的基本的生命活动现象,都与细胞正常的信号转导有关.肝炎病毒蛋白对肝细胞信号调节的影响,一方面通过蛋白一蛋白之间的相互作用而实现,另一方面也通过对肝细胞基因表达谱的影响而实现.因此,利用现代分子生物学技术,对肝炎病毒蛋白结合的蛋白基因进行研究,利用基因差异表达技术对肝炎病毒蛋白反式调节的靶基因进行筛选,阐明肝炎病毒蛋白表达时,能够上调和下调的靶基因类型,对于深入研究肝细胞获得肝炎病毒基因表达之后信号转导途径具有十分重要的意义.中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,在内科传染病学专业博士生导师、生物化学与分子生物学专业博士生导师成军博士、教授、主任医师的领导下,建立了筛选肝炎病毒调节基因结合蛋白的酵母单杂交技术,筛选肝炎病毒蛋白、肝细胞蛋白的结合蛋白的酵母双杂交技术,筛选肝炎病毒蛋白反式调节肝细胞基因的抑制性消减杂交和表达谱基因芯片研究技术等,系统研究肝炎病毒与肝细胞相互作用的分子生物学机制,并有新的发现.本专题研究中所发表的这些重要文章,对于进一步深入探索和研究肝炎病毒对肝细胞正常信号转导的影响,将产生重要推动作用. | 成军 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，2： | 9 |
| 3 | 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因2基因组DNA结构分析及其不同剪切体的克隆化研究显示文摘目的:HCV NS5A病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因NS5ATP2及其不同剪接体基因序列的确立、克隆化研究. 方法:依据我室构建的NS5A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,利用生物信息学技术获得,提取HepG2 细胞的总RNA,进行反转录(RT-PCR),扩增产物与原核表达载体连接,进行测序鉴定. 结果:经测序鉴定成功获得新基因的编码序列,并意外发现了NS5ATP2的不同剪接体,对NS5ATP2基因组进行分析,获得剪接体的编码序列,并成功进行了克降化研究. 结论:利用分子生物信息学技术,发现并鉴定了HCV NS5A反式激活作用的新的靶基因NS5ATP2(615)及其可变剪接体NS5ATP2(216),为研究新基因的生物学功能及丙肝发病机制提供新的依据. | 杨倩 成军 刘妍 洪源 王建军 张树林 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，4： | 7 |
| 4 | 丙型肝炎病毒核心蛋白结合视黄醇脱氢酶11蛋白显示文摘目的:丙型肝炎病毒(HCV)的核心蛋白是HCV基因组编码的一种主要的结构蛋白,研究表明这种病毒的蛋白具有复杂的生物学调节作用.方法:以HCV的核心蛋白作为诱饵(bait),利用酵母双杂交技术,对于肝细胞表达型酵母细胞cDNA文库进行筛选.对于在缺陷型培养基上生长的真阳性酵母集落,进行回交实验,并对于cDNA文库表达载体质粒中插入的基因片段进行序列分析和生物信息学分析.结果:其中一个克隆命名为HCBP12,后来证明为视黄醇脱氢酶11(retinoldehydrogenase11,RDH11),或称为雄性激素调节的短链脱氢酶/还原酶1(androgen-regulatedshort-chaindehydrogenase/reductase1,ARSDR1).结论:这是首次发现和证实HCV核心蛋白与视黄醇脱氢酶11之间存在着相互结合和相互作用,为充分阐明HCV核心蛋白在HCV感染发病机制中的作用,开辟了新的研究方向. | 成军 李克 王琳 陆荫英 刘妍 钟彦伟 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，2： | 6 |
| 5 | 酵母双杂交技术筛选白细胞中HCV核心蛋白结合蛋白基因显示文摘目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合蛋白的基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV核心蛋白基因, 连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提取质粒,转化入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析. 结果:成功克隆出核心蛋白基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X- α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共6个,其中2个高尔基复合体关联蛋白1,1 个Ran结合蛋白M,1个pellino同族体2,2个未知功能蛋白基因(KIAA1949). 结论:成功克隆出丙型肝炎病毒核心蛋白的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索. | 邵清 成军 白雪帆 王琳 张健 梁耀东 刘敏 李强 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，1： | 4 |
| 6 | 基因表达谱芯片技术筛选NS5A-TP4蛋白反式调节基因显示文摘目的:对新基因NS5A-TP4转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能.方法:应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析我室通过抑制性消减杂交技术筛选得到的新基因NS5A-TP4的全长编码序列,并NS5A-TP4构建基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5A-YP4.应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5A-TP4转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测.结果:确定基因NS5A-TP4由762nt组成,编码253aa的蛋白.基因表达谱芯片所检测的1152条目的基因均为GenBank中登录的基因,NS5A-TP4表达质粒转染的细胞有18条差异表达基因,其中12条基因表达增强,6条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、生长调节密切相关.结论:基因表达谱芯片技术可为初步探索新基因的功能提供重要的资料.本实验结果为进一步阐明NS5A-TP4生物学功能及HCV-NS5A的致病机制提供了理论依据. | 杨倩 成军 刘妍 王建军 洪源 张树林 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，2： | 4 |
| 7 | 乙型肝炎病毒基因组新基因的研究及意义显示文摘 | 杨倩 成军 董菁 张树林 | 2004 | 胃肠病学和肝病学杂志2004，13，1： | 3 |
| 8 | 噬菌体表面展示技术筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白显示文摘目的:通过筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白,为隐源性肝炎的发病机制研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,将隐源性肝炎患者血清作为固相筛选蛋白,用噬菌体正常人肝细胞T7cDNA文库进行5轮生物筛选,经噬斑PCR,对筛选克隆进行DNA序列分析,将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索,自GenBank中获得结合蛋白的cDNA和基因组的全长序列,然后再探讨该蛋白在隐源性肝炎发病机制中的作用.结果:噬菌体经过5轮生物富集后,从随机筛选的60个克隆中得到24个阳性克隆,经序列测定后进行同源搜索,初步确定人类HCVNS5A转化调节蛋白13(NS5ATP13)为人体肝脏中固有的与隐源性肝炎血清蛋白结合的蛋白.结论:应用T7cDNA噬菌体表面展示技术,我们发现隐源性肝炎血清蛋白与人类肝细胞HCVNS5A转化调节蛋白13相互作用,在隐源性肝炎发生及抗病毒治疗有重要意义. | 陈京龙 魏红山 刘霞 张黎颖 | 2006 | 世界华人消化杂志2006，14，36： | 3 |
| 9 | 乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅰ结合蛋白1的基因克隆化研究显示文摘目的:发现了与乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅰ(HBV- SP Ⅰ)结合的未知功能蛋白,并克隆了他的全长基因. 方法:以SP Ⅰ核心序列为“诱饵”,应用酵母单杂交技术对人肝细胞cDNA文库进行筛选,得到了一个未知基因,命名为乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅰ结合蛋白1(SBP1).结合生物信息学技术,应用分子生物学技术,克隆了SBP 1的基因编码序列. 结果:经酶切和测序鉴定,结果正确,成功克隆了SBP 1 的基因编码序列. 结论:SBP 1具有完整的开放读码框,可能通过与SP Ⅰ的结合发挥生物学作用. | 洪源 成军 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，1： | 2 |
| 10 | 乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对FAP48信号转导的影响显示文摘0 引言
作为一种分子量为48 kD蛋白,FAP48是细胞内与免疫调节有密切关系的蛋白类型[1].虽然FAP48是在研究免疫抑制剂的作用机制中发现的,但是FAP48蛋白在免疫调节及临床疾病的发生、发展过程中具有十分重要的作用[2]. | 成军 刘妍 杨倩 王建军 洪源 王琳 | 2003 | 世界华人消化杂志2003，11，12： | 2 |
| 11 | 丙型肝炎病毒非结构蛋白5A调节新生多肽复合物启动子转录活性的研究显示文摘目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对新生多肽相关复合物(NACA) 启动子转录活性的影响。方法以我室构建的能够表达NS5A蛋白的pcDNA3.1(-)-NS5A质粒和含有NACA 基因启动子的pCAT3-NACA报告基因质粒共转染HepG2细胞系设为实验组,同时pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞系作为对照组。用酶联免疫吸附法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞的CAT酶表达活性与pCAT3-NACA和pcDNA3.1(-)-NS5A共转染组HepG2细胞的CAT酶表达活性比较,共转染组A值下降了79.3%。结论HCV NS5A能够抑制NACA 启动子的活性,对NACA的表达具有下调作用。 | 戴久增 成军 曲建慧 纪冬 | 2005 | 中华肝脏病杂志2005，13，8： | 2 |
| 12 | 丙型肝炎病毒NS5A蛋白上调NS3TP6基因启动子表达活性的研究显示文摘目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对NS3TP6启动子转录的激活作用. 方法:以我实验室前期研究中得到的HCV NS5A/NS3的基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定NS3TP6的启动子区域(NS3TP6-p),聚合酶链反应(RCR) 扩增NS3TP6-P,克隆至真核报告载体pCAT3中,构建pCAT3-NS3TP6-P报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫黏附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-NS5A共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性. 结果:限制性内切酶消化和序列分析结果表明,构建的NS3TP6-p指导的报告基因表达载体pCAT3-NS3TP6-p正确无误.pCAT3-NS3TP6-p在HepG2细胞中能够启动CAT 的表达;共转染实验中pCAT3-NS3TP6-p+pcDNA3.1(-)- NS5A组CAT的表达活性是pCAT3-NS3TP6-P单独转染试验的1.87倍. 结论:我室克隆的NS3TP6启动子有指导下游基因转录表达的活性;HCV的NS5A蛋白具有对NS3TP6基因启动子的转录具有反式激活作用.本实验进一步验证了我室利用基因表达谱技术研究HCV NS5A蛋白反式激活作用的结果,为进一步阐明丙型肝炎病毒非结构蛋白5A的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据. | 洪源 杨倩 成军 刘妍 王建军 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，4： | 2 |
| 13 | 丙型肝炎病毒非结构蛋白5A结合蛋白37小鼠同源基因的克隆化及结构分析显示文摘目的:克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)结合蛋白37(NS5ABP37)的小鼠同源基因,为阐明小鼠NS5ABP37基因的生物学功能奠定基础,探索HCVNS5A蛋白与NS5ABP37蛋白之间的结合在慢性丙型肝炎的发病机制中可能的作用.方法:利用酵母双杂交系统3,以HCVNS5A蛋白作为诱饵,筛选肝细胞cDNA文库,首先获得HCVNS5A结合的人肝细胞蛋白的新的编码基因.利用生物信息学(bioinformatics)技术确定NS5ABP37的小鼠同源基因序列.利用GenBank在线分析软件,对小鼠NS5ABP37蛋白一级结构特点进行分析.结果:通过酵母双杂交技术获得了人NS5ABP37的编码基因.利用生物信息学技术确定了小鼠NS5ABP37的基因序列.利用分子生物学技术获得了小鼠的NS5ABP37的基因克隆,小鼠NSSABP37基因开放读码框架(ORF)为1488nt,编码产物由495aa组成.计算分子量为54583.67道尔顿,预测等电点(pI)为4.70.小鼠NS5ABP37与白细胞抗原相关(leukocyteantigenrelated,EAR)蛋白前体蛋白(LARproteinprecursor)同源.小鼠HCVNS5ABP37基因序列被美国核苷酸数据库GenBank收录,收录号为AY234860.结论:成功确定、克隆了小鼠的NS5ABP37基因序列,并证实与白细胞抗原相关蛋白前体蛋白具有一定的同源性.这一结果,为进一步阐明小鼠的NS5ABP37基因的功能,阐明HCV感染的发病机制奠定了坚实的基础. | 成军 李克 王琳 陆荫英 刘妍 钟彦伟 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，2： | 2 |
| 14 | NAC(初期多肽相关复合体)及其α亚基NACA显示文摘初期多肽相关复合体(nascent polypeptide-associated complex,NAC)是新生肽链从核糖体上延伸出来第一个接触的异二聚体蛋白复合体,从古生菌、酵母到哺乳动物都高度保守。NAC是一个具有多种功能的蛋白,包括保护新生肽链、调控新生肽转位进入内质网和线粒体、肌肉损伤修复等。其α亚基NACA/αNAC(nascent polypeptide-associated complex alpha subunit)主要在转录调控中起作用。此外,NACA还能调控FADD(Fas-associated with death domain protein)所介导的信号转导。在一些病毒性疾病,如乙肝、丙肝和非洲猪瘟中,NACA能与病毒的某些蛋白相互作用,致使机体功能紊乱。在老年痴呆症和唐氏综合征患者脑细胞中,与正常水平相比,NACA表达下调。 | 刘娇玲 吕晓莉 陈克平 | 2015 | 中国细胞生物学学报2015，37，6： | 1 |
| 15 | 原因不明性肝炎血清蛋白结合蛋白的筛选和鉴定显示文摘目的应用噬菌体表面展示技术寻找原因不明性肝炎血清蛋白成分在肝细胞表面的结合蛋白,探讨原因不明性肝炎发病机制。方法将原因不明性肝炎患者血清蛋白作为固相筛选分子,对噬菌体正常人肝细胞T7 cDNA文库进行4轮生物筛选,经噬斑PCR测序,获得原因不明性肝炎血清蛋白结合蛋白的cDNA序列,将其在GenBank中搜索,比对可能与原因不明性肝炎血清蛋白相结合的蛋白。结果筛选出已有功能研究的蛋白9个和未知功能蛋白3个。结论发现了12种可能与原因不明性肝炎血清蛋白结合的肝细胞表面蛋白,为进一步研究原因不明性肝炎的发病机制提供基础。 | 陈京龙 刘霞 魏红山 孔德晓 | 2007 | 山东医药2007，47，16： | 1 |
| 16 | 基因表达谱芯片技术筛选肝再生增强因子反式调节基因显示文摘目的:为了阐明人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)的表达对于肝细胞基因表达谱的影响, 我们应用基因芯片技术,对于转染和未转染的HepG2细胞进行了分析. 方法:从HepG2细胞RNA中用反转录聚合酶链反应法(RT- PCR)扩增出ALR编码区DNA,常规分子生物学技术构建ALR的真核表达载体pcDNA3.1(-)-ALR,利用脂质体转染技术转染HepG2细胞,ALR的表达以Western blot杂交技术证实.从转染和非转染细胞HepG2种提取总mRNA,逆转录为cDNA,并进行基因芯片技术分析. 结果:经过限制性内切酶分析和序列测定,证实pcDNA3.1 (-)-ALR构建正确.ALR在HepG2细胞中的表达以Western blot杂交技术得到证实.对于ALR重组表达载体和空白载体转染的HepG2细胞的基因表达谱,利用基因芯片技术进行分析.结果表明,2种基因的表达水平上调,24种基因的表达水平下调.这些基因包括淀粉酶α、肿瘤坏死因子受体、金属蛋白酶1组织抑制因子、性激素相关蛋白等基因,相信这些类型的基因在ALR所发挥的生物学效应起到重要的作用. 结论:ALR对于肝细胞基因表达谱存在一定影响;基因芯片技术是分析蛋白反式调节基因表达谱的重要技术途径,有助于了解ALR对肝细胞和其他生物学功能的调节作用. | 王琳 李克 成军 张健 邵清 刘敏 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，4： | 1 |
| 17 | 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A上调硫氧还蛋白还原酶1基因表达的研究显示文摘目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用。方法以我室构建的丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式调节基因的cDNA文库抑制性消减杂交(SSH)筛选结果及基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域(TXNRD1p),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRD1p,克隆至真核报告载体pCAT3_Basic中,构建pCAT3_TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)_NS5A共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果pCAT3_TXNRD1p和pcDNA3.1(-)_NS5A瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3_Basic空载体的9.6倍,pCAT3_TXNRD1p的2.1倍。本实验进一步验证了我室利用SSH技术及基因表达谱技术发现的HCVNS5A蛋白反式激活TXNRDl基因转录作用的结果。结论我室克隆的TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;HCV的NS5A蛋白具有对TXNRD1基因启动子的反式激活作用。 | 纪冬 成军 郭江 杨瑗 董菁 王建军 刘妍 | 2005 | 胃肠病学和肝病学杂志2005，14，4： | 0 |
| 18 | 基因表达谱芯片技术筛选NS5ATP11反式调节基因显示文摘目的:应用基因芯片技术研究未知功能基因NS5ATP11的表达对于肝细胞基因表达谱的影响. 方法:从HepG2细胞RNA中用反转录聚合酶链反应法(RT- PCR)扩增出NS5ATP11编码区DNA,常规分子生物学技术构建NS5ATP11的真核表达载体pcDNA3.1(-)- NS5ATP11,利用脂质体转染技术转染HepG2细胞, NS5ATP11的表达以Western blot杂交技术证实.从转染和非转染细胞HepG2种提取总mRNA,逆转录为cDNA, 并进行基因芯片技术分析. 结果:证实构建pcDNA3.1(-)-NS5ATP11在HepG2细胞中表达正确.NS5ATP11重组表达载体和空白载体转染的HepG2细胞的基因表达改变进行分析.结果表明,8种基因的表达水平上调,10种基因的表达水平下调. 结论:NS5ATP11对于肝细胞基因表达谱存在一定影响;基因芯片技术是分析蛋白反式调节基因表达谱的重要技术途径,有助于了解NS5ATP11对肝细胞和其他生物学功能的调节作用. | 王琳 成军 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，11： | 0 |
| 19 | HCV p7蛋白反式调节新基因3及其剪切体克隆化和生物信息学分析显示文摘目的:筛选HCV p7病毒蛋白反式调节的新靶基因p7TP3,克隆p7TP3基因及其不同剪切体基因序列,并进行功能分析,探讨丙型肝炎病毒(HCV)p7病毒蛋白在HCV致病过程中的作用.方法:依据我们构建的真核表达载体pcDNA 3.1(-)-p7转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总RNA,逆转录为cDNA后进行基因表达谱芯片分析,利用生物信息学技术获得新基因 p7TP3及其可变剪切体的编码序列,设计特异性引物,并对其进行克隆化研究. 结果:经测序鉴定获得新基因p7TP3的编码序列,并发现了p7TP3的不同剪切体,对 D7TP3基因组进行分析,获得剪切体的编码序列,并进行了克隆化研究及生物信息学分析.p7TP3(416 bp)编码蛋白质序列比 p7TP3(477 bp)少TQNTDVYPGLAVFFQNAL IFFSTLIY 26个氨基酸残基,其余序列相同.结论:HCV p7蛋白是一种典型的病毒基因组编码的具有反式调节作用的蛋白.利用分子生物学技术与生物信息学分析,发现并鉴定了HCV p7TP3反式调节作用的新的靶基因 p7TP3及其剪切体,为阐明HCV p7蛋白的反式调节作用及其机制开辟了新的研究方向. | 陶明亮 成军 王春花 郭江 袁菊 靳亚平 毛羽 | 2006 | 世界华人消化杂志2006，14，6： | 0 |
| 20 | 酵母双杂交筛选白细胞中新基因NS3TP6结合蛋白基因显示文摘目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式调节靶基因编码产物NS3TP6 蛋白结合蛋白的基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV NS3TP6蛋白基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提取质粒,转化入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析. 结果:成功克隆出HCV NS3TP6蛋白基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共7个,其中3个人类白细胞CD14抗原,1个人类免疫球蛋白入轻链,3个人类推定蛋白基因(AC124014,AC097504,AC023785). 结论:成功克隆出NS3TP6蛋白的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索. | 邵清 成军 白雪帆 王琳 张健 卢成哲 梁耀东 刘敏 李强 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，7： | 0 |
您所在的机构暂未开通此部分的功能，请联系管理员