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| 1 | 双峰驼IgA基因的原核表达及抗体制备显示文摘为制备抗双峰驼IgA的抗体,将双峰驼IgA重链恒定区基因克隆至pET-28a(+)上,构建重组蛋白质粒pET-28a-IgA-H,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化,以及SDS-PAGE和Western blot验证。用以获得的目的蛋白制备兔抗双峰驼IgA多克隆抗体,并通过ELISA和Western blot检测效价及其特异性。结果表明,获得的重组目的蛋白大小约为39 ku,最佳诱导表达条件为IPTG 23.83μg/mL、诱导时间6 h,且重组蛋白主要以包涵体的形式表达。ELISA检测显示抗体效价达1∶32000,Western blot鉴定抗体能特异性识别原核表达的pET-28a-IgA-H蛋白,并能有效地将双峰驼IgA与IgG区别开来,表明成功获得了双峰驼IgA重链恒定区的重组蛋白及特异性良好的多克隆抗体。 | 吴秀萍 陆佳 张亮 李敏 朱曼玲 张旺东 何晚红 李建飞 王雯慧 | 2019 | 动物医学进展2019，40，12： | 5 |
| 2 | 玉米大斑病菌StTOXE蛋白的原核表达及分析显示文摘【目的】构建玉米大斑病菌StTOXE蛋白的原核表达载体,明确StTOXE融合蛋白的诱导体系和可溶性,为开展该蛋白的功能和结构研究奠定基础。【方法】试验首先克隆了StToxE基因,并通过酶切连接技术将StToxE连接入原核表达载体pET-28a(+)中获得StTOXE融合蛋白表达载体pET28a-StToxE;分别将pET28a(+)和pET28a-StToxE载体分别转入大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达菌株BL21-pET28a和BL21-pET28a-StToxE,通过ITPG诱导,SDS-PAGE和Western Blot检测StTOXE融合蛋白的表达及其可溶性。【结果】构建了玉米大斑病菌StToxE基因原核表达载体pET28a-StToxE,并获得转化子BL21-pET28a和BL21-pET28a-St-ToxE;确定了StTOXE融合蛋白的最适ITPG浓度为0.4~0.6 mmol/L,分子量约为72 kD;并确定了StTOXE融合蛋白主要以包含体的形式存在,且为可溶性蛋白。【结论】实验成功构建了StTOXE融合蛋白表达载体pET28a-StToxE;发现ITPG浓度对StTOXE融合蛋白的表达有显著影响;在37℃条件下,StTOXE融合蛋白基本以包涵体形式存在细胞内,且融合蛋白为可溶性蛋白。 | 张运峰 | 2020 | 西南农业学报2020，33，10： | 2 |
| 3 | 菠萝R2R3-MYB基因家族S20亚族的鉴定显示文摘【目的】鉴定菠萝R2R3-MYB基因家族S20亚族成员,分析其进化、结构与表达模式,为菠萝S20亚族的生物学功能研究奠定基础。【方法】以菠萝基因组数据库为基础,利用生物信息学方法对菠萝S20亚族基因进行鉴定,并对其系统进化、结构、保守基序和表达模式进行系统分析。同时,克隆并原核表达代表性基因AcMYB108a,利用Western blot进行杂交验证。【结果】在菠萝基因组上共鉴定到5个S20亚族基因,分布于5条染色体上。系统进化与保守基序分析发现,不同植物的S20蛋白具有较高的保守性且均具有motif3保守基序。顺式作用元件分析表明,菠萝S20亚族基因与植物逆境胁迫响应过程有关,且受乙烯诱导。基因表达分析结果显示,S20亚族基因的表达存在组织特异性,其中AcMYB108a在果实中的表达水平最高。利用pET原核表达系统成功表达了AcMYB108a重组蛋白,并通过了Western杂交验证。【结论】菠萝S20亚族基因与逆境胁迫响应相关,且受到乙烯诱导。 | 贺涵 刘传和 邵雪花 赖多 匡石滋 肖维强 | 2022 | 西北农林科技大学学报(自然科学版)2022，50，12： | 0 |
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