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| 1 | 一种适用于不同发育期山楂果实总RNA提取的方法显示文摘目的:筛选从不同发育期山楂果实中提取RNA的最佳方法。方法:对不同发育期山楂果实总RNA提取方法进行了探索,考察了Trizol法、改良Trizol法、经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法提取RNA的效果,采用琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白定量仪检测RNA质量。结果:Trizol法、改良Trizol法对成熟期山楂果实RNA提取效果不佳,琼脂糖凝胶电泳检测几乎看不到条带;经典CTAB法对各发育期样本RNA提取质量均不理想;改良CTAB法对不同发育期山楂果实总RNA有良好的提取效果,A_(260 nm)/A_(280 nm)均在2.0左右,28 S和18 S条带完整,满足反转录和聚合酶链式反应(PCR)扩增反应的需求。结论:建立的改良CTAB法是一种有效的山楂果实总RNA提取方法,适用于不同发育期山楂果实RNA的提取,为开展山楂有效成分的生物合成研究奠定了基础。 | 闫述模 袁媛 杨滨 陈敏 | 2016 | 中国实验方剂学杂志2016，22，14： | 9 |
| 2 | 铁观音茶树叶片总RNA提取方法研究显示文摘铁观音茶树不同生育时期叶片为材料,采用Tripure试剂法、中能博彩试剂盒与Tripure试剂相结合的方法提取茶树叶片总RNA。结果表明,Tripure试剂法比结合法更适宜提取铁观音茶树RNA,该方法提取的RNA28S、18S和5SrRNA条带清晰明亮;OD_260/OD_280值在1.7~2.0之间,说明该方法提取的RNA完整性和纯度好,可用于进行后续分子生物学实验。 | 赵姗姗 郭玉琼 潘一斌 王仲 赖钟雄 | 2015 | 龙岩学院学报2015，33，2： | 7 |
| 3 | 改良Trizol试剂法提取番茄成熟叶总RNA探究显示文摘Trizol法是一种简单有效的总RNA提取方法,但在抽提总RNA的过程中,RNA又会受RNase的影响而降解。基于此,以番茄成熟叶为材料,对传统的Trizol试剂法进行了改良,利用nanodrop微量分光光度计及普通琼脂糖凝胶电泳技术对总RNA的浓度和完整性进行了检测。结果表明改良Trizol试剂法提取的总RNA经微量分光光度计测定A260/A280值为1.9;电泳显示28S、18S和5S RNA三条带清晰可见。这些结果说明经改良Trizol试剂法提取的番茄成熟叶总RNA,纯度及质量均达到理想状态,能用于后续分子生物学实验。 | 陈心语 | 2018 | 南方农业2018，12，2： | 6 |
| 4 | Trizol试剂法提取金鱼藻总RNA的技术方法改进显示文摘Trizol试剂法是一种简单有效的总RNA提取方法,由于基因的表达在不同植物或同种植物的不同组织中具有特异性,同种方法很难应用到所有植物中来获得高质量的总RNA,而由于水生植物叶片通常较薄,沉水叶片又常裂为丝状等特点。和陆生植物相比,在提取水生植物总RNA的过程中,经常出现RNA降解的问题。文章以金鱼藻为实验材料,对Trizol法提取金鱼藻总RNA过程中的若干关键步骤进行了探索,优化了适用于提取金鱼藻总RNA提取的实验方法,得到了可用于转录组分析的高得率、纯度好和完整性高的总RNA,为深入开展后续分子生物学研究提供基础保障。 | 姬亚丽 | 2019 | 高原科学研究2019，3，2： | 5 |
| 5 | 不同豆科植物组织RNA提取方法的比较分析显示文摘以紫花苜蓿、木豆、大豆叶片及大豆种子为试验材料,采用Trizon法、改良CTAB法及试剂盒法提取样品总RNA,并比较3种提取方法的提取效果。试验结果表明:试剂盒法提取的4种材料总RNA的28S、18S条带清晰完整,A_(260)/A_(280)比值在1.9~2.0之间,而其他两种方法所获得的总RNA产量较低,且纯度不高。由此可见,试剂盒法能够高效地提取紫花苜蓿、木豆、大豆叶片及大豆种子的总RNA,为以后的分子水平研究打下基础。 | 姚娜 庞天德 邓素媛 丘金花 | 2017 | 分子植物育种2017，15，4： | 5 |
| 6 | 浙贝母鳞茎总RNA提取方法研究及质量评价显示文摘筛选出适合提取浙贝母鳞茎总RNA的方法,为浙贝母功能基因分析奠定良好的基础。采用TRIzon法、TIANGEN DP432、OMEGA R6827和全式金ER501等4种试剂盒法提取浙贝母鳞茎总RNA,并通过分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR及q PCR法对这4种方法提取的总RNA的质量进行评价。4种方法均能提取出总RNA,其中TRIzon法提取的总RNA杂质含量较高;以其为模版进行RT-PCR分析时均可得到清晰的单一目的条带;基因表达分析显示,HMGR基因表达量OMEGA R6827>TRIzon法>TIANGEN DP432>全式金ER501,说明OMEGA R6827试剂盒提取的总RNA较为完整,降解程度低。TIANGEN DP432、OMEGA R6827和全式金ER501均适宜于提取浙贝母鳞茎总RNA,且适用于RT-PCR实验,但进行基因表达分析时,OMEGA R6827试剂盒较为合适。 | 冯亚斌 祝文斌 俞信光 江建铭 沈晓霞 王忠华 | 2016 | 药物生物技术2016，23，2： | 3 |
| 7 | 成熟葡萄果实高质量总RNA提取方法的建立显示文摘成熟葡萄果实中富含多酚多糖类物质,对提取组织RNA造成了很大的干扰。研究分别采用3种试剂盒法和改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,以成熟的葡萄果实为材料,提取总RNA并检验其产量和质量,其中,改良CTAB法是在提取缓冲液中加入了聚乙烯吡咯烷酮、亚精胺、β-巯基乙醇及高浓度的氯化钠。对各组RNA产物进行质量检测,发现3种试剂盒法均没有得到可用的RNA,只有改良的CTAB法能够从新鲜采摘和贮藏的葡萄果实组织中提取出高质量的总RNA,基本无降解和污染,且得率可达到85μg/g以上。进一步研究表明,改良的CTAB法提取得到的RNA可用于后续的RT-PCR、qRT-PCR和CDS扩增试验。改良CTAB法适用于成熟葡萄果实RNA的提取,所得RNA质量良好,满足后续分子试验的需求。 | 闫冬梅 薛美昭 仪慧兰 郝丽宏 乔嘉欣 | 2022 | 山西农业科学2022，50，1： | 2 |
| 8 | 适合于全长cDNA文库构建的猪苓菌核及菌丝体总RNA提取方法比较显示文摘[目的]筛选出适合于c DNA文库构建的猪苓菌核及菌丝体总RNA的提取方法。[方法]采用Trizol改良法和EASY Spin植物快速提取试剂盒法(简称试剂盒法)对猪苓菌丝及菌核的总RNA进行提取。[结果]经紫外分光光度计对所得总RNA的均一性及1%琼脂糖凝胶电泳对所得总RNA的完整性检测后发现,2种方法均可提出完整的总RNA,试剂盒法相较于Trizol改良法其所提取的总RNA质量和纯度都较好,但Trizol改良法所提取的总RNA产率比较高。[结论]LD-PCR成功合成了猪苓菌核和菌丝体的c DNA产物,呈弥散状分布在1 0005 000 bp和7502 500 bp,满足c DNA建库的要求。 | 李杨 李海娜 夏颖 刘忻壑 李艳茹 许广波 | 2018 | 安徽农业科学2018，46，2： | 2 |
| 9 | 大叶蛇葡萄多种来源组织RNA提取效果比较显示文摘本研究以大叶蛇葡萄为材料,采用RIN值作为总RNA质量评价的主要标准,并结合凝胶电泳图谱和Agilent 2100电泳图谱进行对照分析,比较了大叶蛇葡萄不同采样时间、器官及个体植株的RNA提取效果差异。结果表明:5月份采样中提取的RNA质量优于8月份、10月份;果实中提取的RNA质量优于花和叶;低海拔植株中提取的RNA质量优于高海拔植株。该研究以同一种RNA提取方法为基础,对各种来源的植物材料进行比较分析,为研究植物RNA提取效果的影响因素提供了新的参考。 | 答国政 杨敏 黄静 尚祥伟 张秀桥 | 2016 | 基因组学与应用生物学2016，35，10： | 2 |
| 10 | 菠菜乙醇酸氧化酶的酶学特性及同工酶电泳分析显示文摘为了解析菠菜乙醇酸氧化酶(Sp GLO)的酶学特性及同工酶谱。首先提取菠菜的RNA并反转录成c DNA,通过NCBI数据库中提供的菠菜GLO基因mRNA序列信息,设计特异性引物,扩增目标序列并连接到p MD19-T载体上进行测序鉴定;随后再次设计引物并在上游引物加入His标签,克隆Sp GLO基因构建到p YES2载体上,将该载体转入酿酒酵母中进行表达并通过His-tag亲和柱纯化,然后在不同诱导时间点取样测定Sp GLO酶活。结果显示,转化后的酿酒酵母菌株在诱导发酵20 h后能得到最高的GLO活性。以乙醇酸为底物测定Sp GLO在不同p H、不同温度条件下的催化活性,其最适p H值为8. 0,最适温度为39℃。然后分别以乙醇酸、乙醛酸、甘油酸为反应底物,系统分析了Sp GLO的酶学特性,数据显示,Sp GLO对乙醇酸的亲和力最高,其Km为0. 41 mmol/L,Vm为45. 92μmol/(min·mg)。以乙醇酸、乙醛酸为底物,使用草酸抑制其催化活性,其Ki分别为4. 61,2. 09 mmol/L,表明以乙醛酸为底物时Sp GLO的催化活性更易被草酸抑制。同时将纯化后的Sp GLO通过Caps-氨水电泳体系进行同工酶电泳,经过染色后出现2条同工酶带,表明菠菜叶片中可能存在2种GLO同工酶。为将来深入研究植物GLO同工酶之间的生化特性差异并分析其不同生理功能奠定良好的基础。 | 罗莎 黄璐瑶 殷勤 张钰莹 赵燕 张智胜 | 2019 | 华北农学报2019，34，1： | 1 |
| 11 | 玛咖贮藏根总RNA提取方法的比较显示文摘为了筛选出适合玛咖贮藏根总RNA的提取方法,本研究比较了改良异硫氰酸胍法、CTAB法、Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法等4种方法对玛咖根总RNA提取的效果。结果表明:改良异硫氰酸胍法提取效果不理想,CTAB法存在DNA污染;Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法能有效去除多糖,提取出质量高、完整性好的RNA,OD260/OD280值大部分都在1.8~2.0之间,但Trizol法提取RNA的平均得率(156.3μg/g)是E.Z.N.A.TMPlant mi RNA Kit试剂盒法提取RNA的平均得率(48.6μg/g)的3.2倍,说明Trizol法可作为玛咖根总RNA提取的首选方法。 | 尚瑞广 李丽 孙涛 王兵益 | 2018 | 分子植物育种2018，16，6： | 1 |
| 12 | 小麦热激蛋白基因TaHSP90-1的克隆与表达分析显示文摘热激蛋白(heat shock protein,HSPs)是一类广泛存在于植物体内的应激蛋白,在植物响应逆境过程中发挥重要作用。为进一步了解小麦HSP90-1基因并探究其相关生物学功能,搜索小麦基因组序列数据库,获得了小麦A、B、D 3个基因组上的同源序列,根据其染色体位置分别命名为TaHSP90-1-A、TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D,通过同源克隆从12个小麦品种中得到TaHSP90-1 DNA序列。序列分析表明,TaHSP90-1-A、TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D分别含有2 121、2 136和2 130 bp的完整开放阅读框,分别编码707、712和710个氨基酸;其蛋白序列C端均含有1个HSP90结构域,为HSP家族HSP90亚家族成员。TaHSP90-1在不同小麦品种中存在SNP位点,分别位于TaHSP90-1-B第2个内含子区域和TaHSP90-1-D启动子区域。系统进化分析表明,TaHSP90-1-A与二粒小麦处于同一分支;TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D处于同一分支。顺式作用元件分析发现,TaHSP90-1-A、TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D启动子区域均含有干旱响应元件(MBS element)和热响应元件(HSE element)。RT-PCR结果显示,TaHSP90-1-A、TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D在苗期和成熟期的叶片中表达量较高。在干旱胁迫条件下,TaHSP90-1表达量在耐旱小麦品种中较高,为旱敏感小麦品种表达量的150倍;在热胁迫条件下,TaHSP90-1在热敏感与耐热小麦品种中均上调表达,其中,TaHSP90-1-A和TaHSP90-1-D在耐热小麦品种中上调表达倍数更高。 | 陆青 梁婷 王伟伟 汪德州 吴娴 王小燕 唐益苗 | 2022 | 中国农业科技导报2022，24，8： | 1 |
| 13 | “DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验探讨显示文摘人教版高中生物学新教材中“DNA片段的扩增及电泳鉴定”探究实验相比旧教材有诸多处改动,在情境教学理论的指导下,越来越多的教师将单纯的实验课融合情境设计成为能够解决具体生活问题的情境课堂。聚合酶链式反应(PCR)实验技术广泛应用于生命科学研究的各个领域中,但该实验本身具有一定的操作难度。文章将结合相关文献资料和实践经验对“DNA片段的扩增及电泳鉴定”这一探究活动中的常见问题进行剖析并提供技术优化策略。 | 匡彦蓓 | 2023 | 甘肃教育2023，，15： | 0 |
| 14 | 辣椒组织总RNA两种提取方法比较及qRT-PCR验证显示文摘目的:探索提取高质量的辣椒不同组织总RNA的方法,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证。方法:以1年生辣椒(Capsicum annuum)的根、下胚轴、茎、叶、顶端分生组织、花和果实为实验材料,比较改良Trizol Reagent试剂法和RNAprep Pure试剂盒法对辣椒组织总RNA的提取效果。以改良Trizol Reagent试剂法提取的辣椒不同组织总RNA为模板,反转录成cDNA的第一条链;通过RT-PCR和qRT-PCR,研究甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的扩增和自我修剪基因(SELF-PRUNING,CaSP)的组织表达。结果:Trizol Reagent提取的总RNA,28 S和18 S条带较亮,OD_(260)/OD_(280)比值为1.82~2.07;RNAprep Pure提取的总RNA,28 S和18 S条带较暗,OD_(260)/OD_(280)比值为1.93~2.15;Trizol Reagent提取的总RNA能扩增出CaGAPDH基因片段,目的基因CaSP在不同组织中表达水平不同,在根和花中表达更高。结论:Trizol Reagent提取的总RNA,完整性和纯度均较好,得率也较高,能满足后续的分子实验要求。Trizol Reagent试剂法是提取高质量辣椒不同组织总RNA的较好方法。 | 牛西强 罗潇云 胡能兵 黄先忠 | 2021 | 安徽科技学院学报2021，35，6： | 0 |
| 15 | 板栗过氧化氢酶基因CAT1的克隆及生物信息学分析显示文摘为研究板栗过氧化氢酶基因CAT1的功能,旨在为其采后贮藏中品质变化研究提供分子机理基础。以板栗为试材,提取总RNA,通过c DNA末端快速扩增技术(RACE),克隆到板栗CAT1基因c DNA全长,并对其进行生物信息学分析。结果表明,该基因序列全长1485 bp,包含一个1479 bp的开放阅读框,编码492个氨基酸。氨基酸序列分析表明,板栗CAT1与枣(Ziziphus jujuba)、烟草(Nicotiana tabacum)、陆地棉(Gossypium hirsutum)等植物过氧化氢酶CAT1氨基酸序列有较高的相似性。蛋白分析表明,该蛋白分子量为56947.31 Da,理论等电点6.65,属稳定性亲水蛋白;亚细胞定位于过氧化氢酶体,存在30个磷酸化位点,无信号肽。二级结构以α螺旋、无规则卷曲为主。保守结构域预测表明,该基因编码蛋白属于Catalase-like超家族。本研究克隆获得了板栗CAT1基因,为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。 | 葛颖 苗英杰 吴祖芳 翁佩芳 张鑫 | 2017 | 食品工业科技2017，38，13： | 0 |
| 16 | 一种改良的杧果叶片总RNA提取方法显示文摘杧果叶片组织复杂的代谢成分导致RNA提取难度较高。为了提高总RNA提取质量,本研究在已有文献报道方法的基础上,改进并获得了一种利用丙酮洗涤液氮研磨材料和使用0.3 mol/L氯化锂(LiCl)溶液、2倍体积无水乙醇作为第二次沉淀剂的RNA提取方法。实验结果表明,改进方法显著减少了RNA提取过程中的杂质沉淀量,提取的总RNA电泳条带完整,OD260/280为1.9左右,平均得率达到329.8 g/g FW±11.2μg/g FW。RNA反转录和双链c DNA相关序列多态性扩增(SRAP-PCR)的进一步验证实验获得了清晰的多态性条带,表明提取的杧果叶片总RNA具备较高质量,适用于开展分子生物学实验。 | 黄章保 任惠 董龙 蔡昭艳 方位宽 王小媚 苏伟强 刘业强 邱文武 | 2021 | 分子植物育种2021，19，12： | 0 |
| 17 | 芋花叶病毒RNA提取前处理方法优化及快速检测体系的构建显示文摘芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus, DSMV)是芋在无性繁殖过程中不断积累并遗传的最为严重的一种植物病毒。为解决芋因受病毒侵染而导致的品种退化,构建快速且高效的芋花叶病毒RNA提取前处理及快速检测方法,本研究通过对芋叶总RNA提取前处理过程进行改良和优化,探究总RNA中DSMV的两步式RT-PCR、一步式RT-PCR及RT-qPCR快速检测体系。采用液氮联合组织研磨仪的植物总RNA提取前处理法,研磨时间20 min,研磨频率30(1/s),钢珠1个的最佳研磨条件,能获得含量纯度均较高的芋叶总RNA;一步式RT-PCR体系为总RNA模板1.0μL,10×PCR buffer 2.5μL,25 mM Mg1.0μL,2.5 mM dNTPs 1.0μL,10μmol/L上下游引物各1.0μL,200 U/μL逆转录酶0.5μL,5 U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL,25.0μL总体系。一步式RT-PCR体系具有比两步式更快速、简便且灵敏的检测效果。 | 何玉书 吴玲玲 李欣霞 曾颖 张亚楠 | 2022 | 特产研究2022，44，4： | 0 |
| 18 | 玉米成熟子粒RNA提取方法的改良与优化显示文摘玉米成熟子粒含有较多的多糖、蛋白质和脂类,传统的RNA提取方法难以提取到高质量的RNA。以授粉后28 d灌浆后期的玉米子粒为试材,以授粉后7 d的玉米子粒为对照,对目前国内外常用的Trizol法、Biozol法、RNAiso Plus法、三种硅胶柱商业试剂盒总RNA提取方法以及本研究建立的改良提取方法进行比较。结果表明,以授粉后7 d的玉米子粒为材料时,各种方法都能获得较好提取效果;以灌浆后期接近成熟玉米子粒为试材时,采用本研究改良或新建立的提取法,可以大幅降低提取成本,快速提取高质量和高得率的RNA。 | 张园园 赵吉强 姜丽君 史艳慧 陈磊 郭善利 宋建成 Paula E Jameson | 2015 | 玉米科学2015，23，4： | 0 |
| 19 | 桑葚MaMYB44基因的克隆与生物信息学分析显示文摘本研究对桑葚(Morus alba L.cv.‘Cheongil’)MaMYB44转录因子进行了生物信息学等的研究,首先对桑葚中MaMYB44基因进行克隆。通过生物信息学分析,发现MaMYB44基因长度为720 bp,编码239个氨基酸,分子质量为58215.61 Da,理论等电点5.10;通过分析桑葚蛋白MaMYB44的疏水性可知,其中的氨基酸呈现疏水性;通过桑葚MaMYB44蛋白进行跨膜区分析表明,Ma MYB44所有氨基酸都在细胞膜外,无跨膜结构,所以并不是跨膜蛋白;即使有信号肽结构的存在,但是螺旋结构并不存在;然后构建植物表达载体,获取阳性质粒,亚细胞定位后显示MaMYB44基因定位于细胞核中;进一步RT-qPCR分析得出结果,MaMYB44基因在茎中的表达量最高,其次是果实、叶、根。可初步推测该基因主要在桑葚茎中表达并行使功能。 | 李翔宇 赵世成 李文兰 | 2022 | 分子植物育种2022，20，14： | 0 |
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