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| 1 | Trizol试剂法提取金鱼藻总RNA的技术方法改进显示文摘Trizol试剂法是一种简单有效的总RNA提取方法,由于基因的表达在不同植物或同种植物的不同组织中具有特异性,同种方法很难应用到所有植物中来获得高质量的总RNA,而由于水生植物叶片通常较薄,沉水叶片又常裂为丝状等特点。和陆生植物相比,在提取水生植物总RNA的过程中,经常出现RNA降解的问题。文章以金鱼藻为实验材料,对Trizol法提取金鱼藻总RNA过程中的若干关键步骤进行了探索,优化了适用于提取金鱼藻总RNA提取的实验方法,得到了可用于转录组分析的高得率、纯度好和完整性高的总RNA,为深入开展后续分子生物学研究提供基础保障。 | 姬亚丽 | 2019 | 高原科学研究2019，3，2： | 5 |
| 2 | 浓香型白酒酒醅中总RNA提取方法评价显示文摘为探寻我国特有的复杂微生态环境——浓香型酒醅样品总RNA提取方法,本实验建立了一种改良的十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)-苯酚法,并从提取成本及耗时、RNA质量浓度和纯度、电泳结果、反转录效果及高通量测序分析5个方面,比较其与试剂盒法、Trizol法、十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法和月桂酸钠法提取酒醅样品总RNA的效果。结果表明,SDS-苯酚法和CTAB法成本较低,试剂盒法成本最高但耗时最短;试剂盒法提取的总RNA质量浓度最高,分别约为SDS-苯酚法、Trizol法、CTAB法和月桂酸钠法的1.84、2.33、19.14倍和3.09倍;SDS-苯酚法和试剂盒法提取样品总RNA的OD260 nm/OD280 nm和OD260 nm/OD230 nm均分别大于1.8和2.0;SDS-苯酚法电泳条带完整性优于其他方法,CTAB法无法检测到电泳条带。SDS-苯酚法、试剂盒法和Trizol法所提取的RNA能有效反转录为cDNA并将其用于高通量测序分析,3种方法所得优势微生物种属(Lactobacillus和Clostridium)及不同发酵节点酒醅之间的微生物群丰度变化情况基本一致,其中SDS-苯酚法获得的微生物群落多样性最高,且能较好地反映不同酒醅间微生物类群的差异;Trizol法和试剂盒法均能偏好性地多获得1个属,但其含量均很低(0.01%)。本研究系统地比较了5种常见的总RNA提取方法在浓香型酒醅RNA提取的应用效果,其中本研究建立的改良SDS-苯酚法具有一定的综合优势,为今后以RNA为基础的酒醅分子生物学研究提供理论依据,同时对其他富含糖、腐殖质及酚类等杂质的环境样品RNA提取具有较好的借鉴意义。 | 胡晓龙 王康丽 宋丽丽 侯建光 曹振华 吴丽丽 牛广杰 马歌丽 赵书民 赵东 | 2021 | 食品科学2021，42，2： | 2 |
| 3 | 高原地区大鼠耳蜗RNA提取条件优化显示文摘目的探讨在高原地区采用AMBION抽提试剂盒提取RNA的最佳条件。方法采用AMBION抽提试剂盒,对126份大鼠耳蜗(每份耳蜗分为2组,实验组和对照组)提取RNA,实验组采用AMBION抽提试剂盒优化条件提取RNA,对照组按照AMBION抽提试剂盒说明书提取RNA。结果实验组和对照组均能成功提取大鼠耳蜗组织RNA,总RNA的提取量分别为:0.896±0.348μg,0.536±0.404μg(P>0.05);实验组RNA浓度高于对照组,分别为:0.147±0.047μg/μl,0.072±0.022μg/μl(P<0.05);实验组RNA纯度高于对照组,纯度指标A260/280分别为:2.096±0.044,1.900±0.113(P<0.05);实验组RNA完整性指标RIN值高于对照组,分别为:9.689±0.459,8.588±0.662(P<0.05);实验组和对照组28S/18S分别为:1.967±0.141,1.863±0.192(P>0.05)。结论在高原地区采用AMBION抽提试剂盒提取大鼠耳蜗组织RNA,需要优化提取条件,其RNA浓度、纯度和质量都能满足后续实验要求,且样本重复性好。 | 师晶晶 巴桑 普珍 石艳 安芳 龚嘎蓝孜 | 2020 | 中国实验诊断学2020，24，2： | 1 |
| 4 | 菠菜乙醇酸氧化酶的酶学特性及同工酶电泳分析显示文摘为了解析菠菜乙醇酸氧化酶(Sp GLO)的酶学特性及同工酶谱。首先提取菠菜的RNA并反转录成c DNA,通过NCBI数据库中提供的菠菜GLO基因mRNA序列信息,设计特异性引物,扩增目标序列并连接到p MD19-T载体上进行测序鉴定;随后再次设计引物并在上游引物加入His标签,克隆Sp GLO基因构建到p YES2载体上,将该载体转入酿酒酵母中进行表达并通过His-tag亲和柱纯化,然后在不同诱导时间点取样测定Sp GLO酶活。结果显示,转化后的酿酒酵母菌株在诱导发酵20 h后能得到最高的GLO活性。以乙醇酸为底物测定Sp GLO在不同p H、不同温度条件下的催化活性,其最适p H值为8. 0,最适温度为39℃。然后分别以乙醇酸、乙醛酸、甘油酸为反应底物,系统分析了Sp GLO的酶学特性,数据显示,Sp GLO对乙醇酸的亲和力最高,其Km为0. 41 mmol/L,Vm为45. 92μmol/(min·mg)。以乙醇酸、乙醛酸为底物,使用草酸抑制其催化活性,其Ki分别为4. 61,2. 09 mmol/L,表明以乙醛酸为底物时Sp GLO的催化活性更易被草酸抑制。同时将纯化后的Sp GLO通过Caps-氨水电泳体系进行同工酶电泳,经过染色后出现2条同工酶带,表明菠菜叶片中可能存在2种GLO同工酶。为将来深入研究植物GLO同工酶之间的生化特性差异并分析其不同生理功能奠定良好的基础。 | 罗莎 黄璐瑶 殷勤 张钰莹 赵燕 张智胜 | 2019 | 华北农学报2019，34，1： | 1 |
| 5 | 3种兜兰属植物叶片总RNA提取方法的研究显示文摘【目的】旨在获得兜兰属植物叶片总RNA的高质量提取方法,为后续相关分子生物学研究开展提供一定参考。【方法】以紫纹兜兰、长瓣兜兰和杏黄兜兰3种兜兰属植物叶片为试材,通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计法对4种不同提取方法获得的总RNA进行质量检测,筛选最适方法,并通过RT-PCR进一步验证。【结果】使用商品化RNA试剂盒法提取的兜兰属植物叶片总RNA纯度好,但完整性一般;改良CTAB法提取的兜兰属植物叶片总RNA纯度和完整性虽较好,但提取效率不高;改良Trizol法(Ⅰ)提取的兜兰属植物叶片总RNA虽完整性好,但纯度差,存在多糖、蛋白质等杂质污染;改良Trizol法(Ⅱ)获得的兜兰属植物叶片总RNA纯度和完整性均最好;以改良Trizol法(Ⅱ)获得的总RNA为模板,应用RT-PCR能成功克隆获得3种兜兰属植物rbcL基因252 bp的目的序列。【结论】综合比较以上4种方法,试验改良的Trizol法(Ⅱ)是适合紫纹兜兰、长瓣兜兰和杏黄兜兰3种兜兰属植物高质量总RNA提取的有效方法。 | 李国泽 邵亚林 常玮 丁勇 | 2021 | 西南农业学报2021，34，4： | 1 |
| 6 | 高粱GRF基因家族鉴定及在非生物胁迫下的表达分析显示文摘生长调控因子(growth regulation factor, GRF)是植物中特有的一类转录因子,在植物激素调控、生长发育以及胁迫应答等多个领域扮演重要角色。对高粱GRF基因家族成员进行筛选鉴定,得到8个家族基因,分析了这些基因的理化性质、保守蛋白序列、基因功能及其共线性,分析了这些基因在非生物胁迫下转录组表达差异。结果表明,GRF基因家族结构较为保守,启动子元件含有干旱、低温、茉莉酸等响应元件,推测该家族基因参与生物及非生物胁迫应答响应。通过盐胁迫和烯效唑处理下的转录组数据分析,得到一个与耐盐相关的基因(SORBI_3002G297800)和一个与激素相关的基因(SORBI_3006G203400),为进一步探究这些基因在高粱应对非生物胁迫中的作用提供了重要参考。 | 崔江慧 杨溥原 常金华 | 2021 | 中国农业科技导报2021，23，4： | 1 |
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