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| 1 | 神经营养因子和生长因子在神经干细胞中的研究进展显示文摘神经营养因子(neurotrophic factors,NF)包括神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neural neurotrophic factor,BDNF)等。生长因子(growth factors,GF)家族成员有酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,a FGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等,两大家族均对神经系统的发育以及维持神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的存活、促进其增殖、分化并诱导其定向迁移等众多方面发挥着重要作用。本文简要概括介绍NF中的重要成员之一脑源性神经营养因子,GF家族中的重要成员VEGF和b FGF对NSCs的影响。 | 曾维军 周文胜 王佳 | 2015 | 临床与病理杂志2015，35，3： | 6 |
| 2 | 人脐带间充质干细胞生物特性比较:胰酶冷消化和组织块法体外培养显示文摘背景:以往采用胰酶冷消化法培养脐带间充质干细胞的研究较少。目的:比较两种方法体外培养人脐带间充质干细胞的生物学特性。方法:采用胰酶冷消化法和组织块法从人脐带中分离、纯化和传代培养人脐带间充质干细胞,记录首次出现贴壁细胞时间及原代培养周期,倒置相差显微镜观察脐带间充质干细胞的形态及生长情况,制作第3代脐带间充质干细胞生长曲线,流式细胞仪分析检测第3代脐带间充质干细胞表面标志的表达,第3代脐带间充质干细胞加入成神经诱导培养基诱导分化第3天行荧光免疫化学染色检测Nestin的表达。结果与结论:使用上述两种方法均可获得脐带间充质干细胞,胰酶冷消化法首次出现贴壁细胞时间早于组织块法(P<0.05);原代培养周期差异无显著性意义(P>0.05)。倒置相差显微镜下细胞均为贴壁生长,形态为成纤维细胞样,但胰酶冷消化法培养的少数原代细胞呈多角形,不规则,细胞的体积较组织块法大。组织块法获得第3代细胞的增殖速率显著快于胰酶冷消化法,在进入对数生长期后各个时间点细胞数量差异有显著性意义(P<0.05)。两种细胞具有均一的细胞表型,均表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45。两种方法培养出来的第3代脐带间充质干细胞经诱导后,免疫荧光均显示神经干细胞特征性标志物nestin阳性表达。结果表明胰酶冷消化法与组织块法均能培养出脐带间充质干细胞,但组织块法更适合于此类细胞的培养,对细胞的伤害更低。 | 张飞 王一雄 武忠炎 李贵才 曹鹏 王武 | 2014 | 中国组织工程研究2014，18，41： | 4 |
| 3 | 色素上皮衍生因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用显示文摘目的观察色素上皮衍生因子色素上皮衍生因子(pigment epithelial-derived factor,PEDF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(pigment epithelial-derived factor gene-odified human umbilical cord mesenchimal stem cells,PEDF-MSCs)对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)模型中PEDF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及对视网膜神经节细胞的保护作用。方法绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的慢病毒(lentivirus,LV)为载体,将PEDF基因以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1、10、20、50体外转染至人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)中,应用RT-PCR及ELISA法分别检测以最佳MOI值转染细胞中PEDF的表达情况。选取健康SD雄性大鼠,采用高眼压的方法制成RIRI模型,随机分为正常对照组(N组)、磷酸盐缓冲液(phosphate bufferedsaline,PBS)治疗组(PBS组)、hUCMSCs治疗组(M组)及PEDF基因转染的hUCMSLs治疗组(P组);N组不予特殊处理,其余三组大鼠造模成功后立即进行干预治疗,PBS组给予PBS治疗,P组与M组分别给予PEDF-MSCs、hUCMSCs治疗。5 d后处死大鼠,尼氏染色计数视网膜神经节细胞数目,计算视网膜内层厚度,RTMPCR检测大鼠视网膜PEDF和VECGF的mRNA表达情况。结果荧光显微镜下观察到转染率高达75.8%。RT-PCR结果显示,转染后PEDF-MSCs的上清液中PEDF mRNA相对表达量(4.34±0.29)明显高于hUCMSCs(1.08±0.15),差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,转染后PEDFMSCs上清液中PEDF蛋白表达量[(83.09±7.58)μg·L^(-1)]明显高于hUCMSCs[(12.30±1.24)μg·L^(-1)],差异有统计学意义(P<0.05)。尼氏染色结果显示造模后PBS组大鼠神经节细胞数量变少,治疗5 d后,P组、M组大鼠神经节细胞数量均高于PBS组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);P组高于M组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗5 d后,P组、M组大鼠视网膜厚度均厚于PBS组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);P组厚于M组。RT-PCR检测结果显示,P组PEDF mRNA表达水平显著升高,VEGF mRNA表达水平下降,与PBS组、M组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论玻璃体内注射PEDF-MSCs能上调RIRI模型大鼠视网膜PEDF表达,并下调VEGF表达,对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有保护作用。 | 常鲁 许丽 韩新红 王慧凤 李艳 | 2018 | 眼科新进展2018，38，4： | 3 |
| 4 | 在5-杂氮胞苷诱导下人脐带间充质干细胞生物活性特性及向心肌样细胞的分化显示文摘背景:人脐带间充质干细胞属于一类特殊的干细胞,该类细胞数量有限,且分离、纯化难度系数较大,并且临床上对于该类细胞生物学特性缺乏认识。目的:研究人脐带间充质干细胞的生物活性特性,探讨人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的作用。方法:无菌采集剖宫产新生儿脐带,在胶原酶Ⅱ下进行消化,采用组织块培养法分离人间充质干细胞。利用免疫细胞化学染色检测细胞表面标志,观察细胞形态学特性,并采用MTT法检测细胞增殖绘制其生长曲线,将获得的人脐带间充质干细胞进行培养,待细胞生长到70%-80%融合时,采用10μmol/L5-杂氮胞苷进行24 h诱导。结果与结论:(1)组织块贴壁法培养1周后:可见人脐带间充质干细胞,去组织块加入培养液培养后,人脐带间充质干细胞集落生长;(2)第3代及第10代人脐带间充质干细胞接种24 h内:细胞为潜伏期,此后呈对数生长,倍增时间为30 h;(3)免疫细胞化学染色结果显示:第3代细胞90%以上表达基质细胞相关表面标志物CD44、CD29等,不表达造血及内皮细胞标志物CD28、CD31;(4)人脐带间充质干细胞诱导3周后:细胞突起消失,出现不规则形状,诱导4周后呈现圆形,且表达心肌特异性免疫标志物。(5)结果提示人脐带间充质干细胞具备较强的增殖能力:分离的细胞具备充质干细胞的基本生物学特性,能够在5-杂氮胞苷诱导下分化为心肌样细胞。 | 李平 皇甫春荣 汤春辉 陈一晖 | 2016 | 中国组织工程研究2016，20，14： | 3 |
| 5 | 不同组织上清液对不同间充质干细胞增殖和分化的作用显示文摘干细胞与再生医学是当今生命科学最前沿的研究领域。再生医学作为除药物、手术的第3种治疗途径其前景广阔。间充质干细胞由于具备免疫调节功能、多向分化潜能、低免疫原性和无毒副作用等特点,已在临床一定范围开始应用。不同的组织培养上清液对间充质干细胞体外增殖和分化可产生促进或者抑制作用。作者通过比较不同培养上清液对间充质干细胞体外增殖和分化的影响来阐述促进或抑制间充质干细胞体外增殖和分化的经济有效方法、利弊以及对再生医学的意义。 | 李鑫 马海英 | 2016 | 东南大学学报(医学版)2016，35，2： | 3 |
| 6 | 皮下注射碱性成纤维细胞生长因子促进血管性痴呆大鼠海马神经干细胞的增殖显示文摘背景:碱性成纤维细胞生长因子是一种神经营养因子,在中枢神经系统内广泛分布,可以与其相应受体结合,发挥重要的生理作用。目的:探讨皮下注射碱性成纤维细胞生长因子对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和海马nestin阳性神经干细胞增殖的影响。方法:纳入30只SD大鼠,随机分为3组(n=10):血管性痴呆组、假手术组以及治疗组。血管性痴呆组和治疗组制备血管性痴呆模型,治疗组皮下注射碱性成纤维细胞生长因子。治疗后4周,采用Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,免疫组织化学染色检测海马nestin阳性细胞数的变化。结果与结论:(1)血管性痴呆组的潜伏期显著长于假手术组和治疗组,进出目标象限次数显著少于假手术组和治疗组(P<0.05)。假手术组和治疗组间比较,差异无显著性意义(P>0.05);(2)在荧光显微镜下,治疗组海马CA1,CA2,CA3区均可观察到带有黄绿色荧光的碱性成纤维细胞生长因子阳性神经元;(3)治疗组海马CA1区分布大量nestin阳性神经元,假手术组也分布较多nestin阳性神经元,血管性痴呆组nestin阳性神经元分布较为稀疏;(4)结果表明,皮下注射的碱性成纤维细胞生长因子能迁移至海马区,刺激海马nestin阳性神经干细胞增殖,进而改善大鼠学习记忆能力。 | 刘森 戴振霞 吴春芳 胡敬 崔蓓 | 2016 | 中国组织工程研究2016，20，23： | 2 |
| 7 | 静脉移植人脐血单个核细胞治疗脑出血大鼠疗效的microPET-CT评价及抗炎机制显示文摘背景:脐血中分离出的单个核细胞含有丰富的细胞类型,在细胞替代治疗、基因治疗以及组织工程学中具有重要的研究和应用价值。目的:通过micro PET-CT及Longa评分评估人脐血单个核细胞治疗大鼠脑出血的疗效,同时探讨其部分治疗机制。方法:采用二次注血/退针法制作脑出血大鼠模型,造模成功大鼠随机分为移植组与对照组,将从人脐血中分离出的单个核细胞经尾静脉注入移植组大鼠体内,对照组大鼠造模成功后不予治疗。各组大鼠均于移植前及移植后的第3,7,14,21天,通过micro PET-CT及Longa评分对大鼠脑代谢变化及神经功能恢复情况进行评估;通过ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的水平。结果与结论:(1)人脐血单个核细胞移植治疗后第7,14,21天,与对照组相比,移植组大鼠血肿中心及血肿周围脑代谢水平均显著升高(P<0.05),血肿及其周围缺血组织体积及Longa评分显著降低(P<0.05);(2)人脐血单个核细胞移植后第3,7,14天,移植组两种因子水平均较对照组显著降低(P<0.05),移植后第21天,两组血清中血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平均降至正常水平;(3)结果说明,人脐血单个核细胞移植可促进大鼠脑出血的神经功能恢复,其机制可能与其能够减少炎性因子表达及抑制炎性反应有关。 | 靳娜 姚星宇 张国华 杨丽敏 李剑波 刘婕 魏林洹 段瑞 | 2018 | 中国组织工程研究2018，22，25： | 1 |
| 8 | 人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜光损伤的保护作用显示文摘目的观察体外人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)能否由视网膜匀浆上清液诱导分化为神经样细胞及移植到视网膜光损伤大鼠玻璃体内后存活、迁移、整合及分化的情况。方法无菌条件下采集健康足月剖宫产胎儿的正常脐带组织,经2.5 g·L^(-1)胰蛋白酶和1 g·L^(-1)胶原酶消化、贴壁培养获得hUCMSCs。将CM-Dil标记的hUCMSCs注入光损伤大鼠玻璃体内,观察眼内整合分化情况,对正常对照组、光损伤组、PBS治疗组和hUCMSCs治疗组大鼠视网膜外核层层数和厚度进行对比分析。结果 hUCMSCs培养48 h后贴壁生长,呈长梭形,14 d后可见细胞融合成片。光损伤后大鼠视网膜外核层结构紊乱、细胞层数减少,厚度变薄,与正常对照组[(40.73±1.32)μm]相比,hUCMSCs治疗组[(31.28±1.79)μm]与PBS治疗组[(17.21±1.02)μm]及光损伤组[(12.68±1.42)μm]的视网膜外核层厚度均变薄(均为P<0.05)。与光损伤组相比,PBS治疗组和hUCMSCs治疗组视网膜外核层层数显著增加。结论 HUCMSCs移植到光损伤大鼠玻璃体内后能存活、迁移及整合到受损伤视网膜,hUCMSCs玻璃体内移植可抑制光损伤大鼠光感受器的凋亡。 | 徐静 陈尧 李娜 牛膺筠 | 2019 | 眼科新进展2019，39，5： | 0 |
| 9 | 一株用于研究环境因素暴露效应的神经样细胞显示文摘为建立一株可用于研究长期环境因素暴露的永生化神经样细胞,使用b FGF作为预诱导剂,BHA、DMSO和β-巯基乙醇作为诱导剂,诱导人脐带间充质干细胞向神经样细胞分化,观察细胞形态变化,并通过细胞免疫荧光和RTPCR检测Nestin、NSE、GFAP和MAP2的表达,判断是否具有神经样细胞特异性.将诱导成功的细胞连续传代,利用稀释法分离出单细胞克隆.筛选出可以连续传代50次以上的细胞,RT-PCR检测Nestin和MAP2基因表达差异,判断所获得的单克隆细胞的神经样特性是否能够维持.结果显示,诱导后的细胞胞体凸起,免疫荧光检测Nestin、NSE、GFAP蛋白表达均阳性,说明成功将MSCs诱导为神经样细胞,Nestin基因表达在传代11次时升高1.32倍,在50次时降低8.85倍,而MAP2基因表达在传代11次时升高2.12倍,在50次时升高7.29倍,说明其已经由神经干细胞分化为神经样细胞.本研究得到的神经样细胞单克隆可以连续传代,并且保持神经样细胞特性,可以作为检测环境因素对神经系统慢性损伤作用研究的细胞模型. | 顾敬超 王明连 王群 李艳 刘强强 路通 曾毅 | 2017 | 应用与环境生物学报2017，23，3： | 0 |
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