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| 1 | 苹果ACO1基因及转录因子MdHB-1基因的表达模式显示文摘研究苹果Md ACO1基因及转录因子Md HB-1基因在不同器官和不同发育阶段的表达量及其对外源乙烯的反应,以期探讨两基因之间的可能关系。以苹果品种'皇家嘎拉'为试材,利用实时荧光定量聚合酶链式反应技术分析不同器官和果实不同发育阶段基因的表达,以及乙烯利处理果实对基因表达的影响。在不同组织器官中,Md HB-1在花瓣中表达量较高,而Md ACO1在成熟果中表达量较高。在果实不同发育阶段中Md HB-1在未成熟果中(盛花期40 d后)表达量最高,Md ACO1在成熟果中尤其是花后100 d表达量最高。外源乙烯利(500?mg/L)处理的果实放置0~1 d时抑制Md HB-1的表达,但在7 d后其表达量增高;Md ACO1表达量在外源乙烯利处理后迅速升高,并随着放置时间的延长而大幅度增高。转录因子Md HB-1可能参与了苹果幼嫩果实和花器官中其他相关基因表达的调控,这一过程似与Md ACO1无关。Md ACO1参与了果实的成熟过程,但并无受Md HB-1调控的迹象。外源乙烯会诱导成熟果实ACO1基因的过量表达,这一反馈调节过程似与Md HB-1无关。 | 朱敏 尹明安 叶红红 任小林 | 2014 | 食品科学2014，35，23： | 6 |
| 2 | 苹果转录因子MdHB1的原核表达与多克隆抗体制备显示文摘HD-Zip转录因子在植物生长发育过程中具有重要作用,蛋白水平的研究有助于进一步阐释其功能。将苹果转录因子基因Md HB1分别连接到p GEX-6p-1和p ET-28a(+)表达载体,热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),随后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导培养,分别得到了带有GST和6×His标签的Md HB1融合蛋白(分别命名为Md HB1-GST和Md HB1-His_6)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,在18、28℃和37℃3个温度诱导条件下都是沉淀中Md HB1-GST融合蛋白的量较多,37℃尤为明显,较低的诱导温度(18℃和28℃)能够提高融合蛋白Md HB1-GST可溶性形式存在的比例;28℃条件下50 mg/L IPTG诱导的总蛋白量在8 h左右达到最大,且受IPTG质量浓度(10、50、100 mg/L)的影响不大。以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白Md HB1-His_6为抗原,成年兔免疫以制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测结果表明,所得抗体效价较高。蛋白质免疫印迹实验结果说明,所制备多克隆抗体特异性良好,能够从菌体和苹果幼叶总蛋白中成功检测Md HB1蛋白。综上所述,本实验所得多克隆抗体能够用于深入研究Md HB1在植物体内的功能。 | 戴杰雨 姜永华 张玉洁 王豪杰 刘潇然 刘翠华 任小林 | 2018 | 食品科学2018，39，8： | 3 |
| 3 | 苹果MdHB-1基因启动子中的乙烯响应元件对外源乙烯的响应分析显示文摘通过PlantCARE和PLACE软件在线分析预测表明,在苹果Md HB-1启动子中存在一个乙烯响应元件(距ATG上游576 bp)。为了探究该启动子中的乙烯响应元件对不同浓度乙烯的响应,以苹果品种‘皇家嘎拉’(Malus domestica Borkh.cv.Royal Gala)基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到长度分别为680 bp(含有乙烯响应元件)和485 bp(不含有乙烯响应元件)的启动子序列,构建GUS报告基因瞬时表达载体,依靠农杆菌介导转化烟草叶片,检测经过不同浓度乙烯利(0、500、1 000和1 500mg·L^(-1))处理的转基因烟草叶片的GUS蛋白活性。结果表明,该乙烯响应元件受到外源乙烯正调控作用,随着处理的外源乙烯浓度的增大,正调控效应先升高达到最大值后逐渐减弱,500 mg·L^(-1)乙烯利能最大程度地提升乙烯响应元件活性。 | 王豪杰 姜永华 刘艳利 戚英伟 刘翠华 任小林 | 2016 | 植物生理学报2016，52，3： | 3 |
| 4 | 苹果转录因子MdHB1自激活作用及其互作蛋白分析显示文摘筛选苹果转录因子MdHB1的互作蛋白,可以为研究苹果生长发育过程中各种信号分子网络提供线索和依据。本文以苹果品种‘皇家嘎啦’为试材,应用SMART技术构建酵母双杂交cDNA文库。分析MdHB1的转录活性区域并验证其对Y2HGold的细胞毒性作用,利用诱饵载体pGBKT7-MdHB1-N进行文库筛选,获得了24个阳性克隆,测序分析后得到9个无重复的MdHB1互作蛋白,其涉及光合作用、病虫害防御、逆境胁迫等过程。 | 刘艳利 姜永华 王豪杰 戚英伟 刘翠华 任小林 | 2015 | 植物生理学报2015，51，11： | 1 |
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