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| 1 | 逆转录病毒介导的凋亡素基因诱导人结肠癌细胞Lovo的凋亡显示文摘目的构建强力霉素诱导型重组凋亡素基因逆转录病毒载体,观察强力霉素诱导凋亡素基因表达的情况及对人结肠癌细胞的影响。方法构建重组逆转录病毒表达载体pRevTRE-VP3。调节载体pRevTet-on和表达载体pRevTRE-VP3分别转染PT67包装细胞后,收集包装好的病毒依次感染人结肠癌细胞系Lovo,用抗生素筛选出抗性细胞株Lovo/on-vp3。通过向培养液中加入或去除强力霉素调控凋亡素基因在Lovo/on-vp3细胞中的表达,Annexin V-FITC/PI双染色后,以流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经酶切和测序鉴定,重组逆转录病毒载体pRevTRE-VP3构建成功,并添加了kozak序列。筛选出可经四环素调控凋亡素基因表达的人结肠癌细胞株Lovo/on-vp3,经PCR和RT-PCR证实凋亡素基因已整合入细胞DNA,并得到了表达;Lovo/on-vp3细胞在1mg/L强力霉素培养环境中培养24h、48h和72h凋亡率明显高于无强力霉素环境中相同时间点的细胞凋亡率,两者差异有显著性。结论凋亡素基因经RevTet系统导入人结肠癌细胞Lovo后,在强力霉素诱导下可表达凋亡素蛋白并诱导Lovo细胞凋亡。并随诱导时间延长凋亡素蛋白表达增加、细胞凋亡增多。 | 王娜 朱惠明 杨俊文 黄勋 | 2010 | 肿瘤防治研究2010，37，2： | 3 |
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