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| 1 | 携带凋亡素基因重组腺病毒的制备及诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究显示文摘[目的]利用细菌内同源重组法构建携带凋亡素VP3基因的重组腺病毒并观察其体外诱导结肠癌细胞凋亡的作用。[方法]设计VP3 c DNA扩增引物,从PET15b-VP3质粒中扩增VP3的DNA序列,与线性p Shuttle-IRES-hr GFP连接构建p Shuttle-VP3-hr GFP重组穿梭质粒,PCR和Eco RⅤ酶切电泳鉴定;重组穿梭质粒经Pmel酶切线性化后,转化含p Adeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒p Ad-VP3-hr GFP,PCR、Pac I酶切电泳及测序鉴定;线性化重组腺病毒质粒经脂质体转染AD293细胞进行p Ad-VP3-hr GFP重组腺病毒的包装和扩增,Cs CI密度梯度离心法进行病毒浓缩和纯化并将其作用人结肠癌SW480细胞,观察其对细胞凋亡及周期分布的影响。[结果]p Shuttle-VP3-hr GFP重组穿梭质粒构建成功;p Ad-VP3-hr GFP重组腺病毒质粒经酶切获得一大于23kb的大片段和4.5kb的片段,PCR反应扩增出402bp的片段,测序证实VP3-hr GFP编码区成功克隆入腺病毒p Ad中,且其序列与Gene Bank中VP3序列完全一致;成功包装出携带VP3基因的腺病毒,滴度为1.738×1012opu/ml,重组腺病毒可阻滞结肠癌细胞周期于G0/G1期,诱导细胞凋亡,MOI值越大作用效应越显著(P<0.05,P<0.01)。[结论]细菌内同源重组法可快速、高效制备携带凋亡素基因的重组腺病毒,并具有较强的抗肿瘤作用,为深入研究VP3基因功能提供了选择。 | 邓守恒 陈萍 蔡晓军 李林均 曹风军 | 2015 | 肿瘤学杂志2015，21，7： | 1 |
| 2 | 携带凋亡素VP3基因重组腺病毒的制备及其在人结肠癌SW480细胞中的表达显示文摘目的利用细菌内同源重组法构建携带凋亡素VP3基因的重组腺病毒并观察其在人结肠癌SW480细胞中的表达。方法扩增目的基因VP3 cDNA,与EcoRⅤ酶切线性化的pShuttle-IRES-hrGFP穿梭质粒连接构建重组穿梭质粒pShuttle-VP3-hrGFP,PmeⅠ酶切线性化pShuttleVP3-hrGFP并转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAd-VP3-hrGFP,并经PCR、EcoRⅤ、PacⅠ酶切电泳及测序鉴定,线性化的重组腺病毒质粒经脂质体包裹转染AD293细胞进行重组腺病毒的包装和扩增,CsCI密度梯度离心法行病毒浓缩和纯化并将其感染人结肠癌SW480细胞中进行表达,观察其感染效率及VP3蛋白表达水平。结果 pShuttle-VP3-hrGFP重组穿梭质粒构建鉴定成功,PCR反应扩增出402 bp的片段;pAd-VP3-hrGFP重组腺病毒质粒经酶切获得大于23 kb的大片段和4.5 kb的片段,重组腺病毒质粒经测序证实VP3-hrGFP编码区成功克隆入腺病毒p Ad中,且其序列与Gen Bank中VP3 CDNA序列完全一致。成功包装出携带VP3基因的重组腺病毒,滴度为1.738×10^(12)opu/ml,重组腺病毒可在SW480细胞内得到有效表达。结论用细菌内同源重组法可快速、高效地制备携带凋亡素VP3基因的重组腺病毒,并可在人结肠癌细胞中高效表达。 | 邓守恒 胡茵 曹风军 蔡晓军 李林均 陈萍 | 2017 | 中国老年学杂志2017，37，18： | 0 |
| 3 | 携带鸡贫血病毒凋亡素基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定显示文摘目的构建携带鸡贫血病毒凋亡素VP3基因的重组腺病毒质粒。方法设计VP3 c DNA扩增引物,从PET15b-VP3质粒中扩增VP3的DNA序列,与线性p Shuttle-IRES-hr GFP-2连接,PCR和EcoRⅤ酶切电泳鉴定;穿梭质粒p Shuttle-VP3-EGFP经Pmel酶切线性化后,转化含p Adeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒p Ad-VP3-EGFP,质粒经PCR、Pac I酶切电泳及测序鉴定。结果线性化的p Shuttle-VP3-EGFP转化含p Adeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,重组质粒经酶切获得一大于23 kb的大片段和4.5 kb的片段,PCR反应扩增出了402 bp的片段,重组质粒测序证实VP3-EGFP编码区成功克隆入了腺病毒p Ad中,且其序列与Gene Bank中VP3 CDNA序列完全一致。结论用细菌内同源重组法可快速、高效地制备携带凋亡素VP3基因的重组腺病毒质粒,为深入研究VP3的抗肿瘤效应及机制奠定了基础。 | 邓守明 蔡召忠 | 2015 | 实用癌症杂志2015，30，7： | 0 |
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