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| 1 | 抗甲硝唑人源scFv抗体筛选与鉴定显示文摘目的 筛选甲硝唑人源单链可变区(scFv)抗体,为研究快速检测试剂盒奠定基础.方法 采用噬菌体表面展示技术,以甲硝唑作为抗原,固相包被于Nunc板,应用半合成的人源单链可变区抗体文库技术,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选抗甲硝唑的90个克隆,利用酶联免疫吸附法(ELISA)、交叉反应及竞争抑制实验,对其进行免疫学检测和鉴定,获得与甲硝唑结合活性较强的scFv阳性克隆,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经酶切鉴定SfiⅠ/NotⅠ后,亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌XL1-Blue,提取质粒进行酶切鉴定分析.结果 经过筛选90个克隆中有16株克隆ELISA的490 nm波长吸光度(A490nm)值较高,将这些噬菌体上清与牛血清清蛋白(BSA)进行交叉反应,确定有4株交叉反应较弱,结合3次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株阳性克隆.亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌感受态细胞XL1-Blue.结论 提取质粒酶切片段与目的相符,为下一步研究其特异性亲和力的研究创造了条件. | 马巍娜 刘雪林 宋宏彬 沈建良 黄友章 宫立众 向丹 臧丽梅 | 2010 | 现代检验医学杂志2010，25，4： | 2 |
| 2 | 盐酸克伦特罗生物素化单链抗体在大肠埃希氏菌中的表达显示文摘目的 提取盐酸克伦特罗(CLB)生物素化抗体片段蛋白进行表达,为下一步纯化及农兽药品快速检测奠定基础。方法 确定一株生物素化CLB噬菌体抗体 “pHEN1-BHNS-CLB1”对其进行蛋白表达,即从噬菌粒“PHEN1-BHNS-CLB1”切下scFv基因片段,亚克隆至能引导可溶性表达的载体pCANTAB5E上,完成了重组质粒的构建,将所构质粒转化大肠埃希氏菌感受态细胞BL21。命名“5E-BHNS-CLB1”,并对“5E-BHNS-CLB1”进行PCR及酶切鉴定后,测序分析。结果 ELISA结果证明其具有较好的亲和性,竞争抑制ELISA、与gp120蛋白及三聚氰胺的交叉反应ELISA结果均证明其具有很好的特异性,片段大小与预想目的片段大小一致,SDS-PAGE及Western blotting的结果显示,其分子量大小与目的一致,并能与抗E-tag标签抗体结合显色。结论 说明表达的蛋白能与表达载体5E后带有E-Tag标签的短肽作用,含有E-Tag标签,是我们要表达的目的蛋白,为下一步纯化蛋白创造了条件。 | 马巍娜 刘雪林 宋宏彬 沈建良 黄友章 刘毅 向丹 | 2016 | 现代检验医学杂志2016，31，4： | 1 |
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