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| 1 | 乙型肝炎病毒包膜大蛋白的自激活显示文摘目的:构建乙型肝炎病毒包膜大蛋白的酵母表达载体,研究其自激活作用.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBV包膜大蛋白(LHBs),前-S1蛋白(pre-S1),前-S2蛋白(pre-S2)及主蛋白(SHBs)的编码基因,并在其5’端引入EcoRI/BamHI内切酶位点,分别连接入酵母表达载体pGBKT7中,构建酵母表达质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后分别铺于含有X-α-半乳糖的营养缺陷型培养基SD/-Trp和SD/-Trp-His-Ade上进行自激活验证(蓝/白筛选).结果:成功克隆出编码各种HBV包膜蛋白的基因,构建表达载体并在酵母细胞中表达,转化了pGBKT7-LHBs和pGBKT7-preS1的AH109酵母细胞在两种营养缺陷型培养基上均可正常生长,并且可以产生α-半乳糖苷酶从而在铺有X-α-半乳糖的培养基上呈现蓝色,而转化了pGBKT7-preS2和pGBKT7-SHBs的细胞只能在SD/-Trp的培养基上生长,且没有变蓝.结论:LHBs可以作为反式激活子发挥作用,代替GAL4蛋白的激活域来激活GAI4上游激活序列(GALUAS)和TATA盒,从而激活了下游报告基因(ADE2,HIS3,MEL1和LacZ)的表达,并且其自激活作用来自于前-S1结构域. | 纪冬 成军 陆荫英 董菁 郭江 刘妍 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，10： | 5 |
| 2 | 乙肝病毒pre-S1基因的研究现状显示文摘乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)引起的以肝脏炎症和坏死病变为主的传染病,它是嗜肝脱氧核糖核酸病毒(Hepadnavirus)科中哺乳动物病毒属的一员,其外膜蛋白基因包括s蛋白、前S1蛋白(pre—S1)和前s2蛋白(pre—S2)3种成分。 | 甘云辉 徐亮 夏冬 | 2011 | 现代临床医学2011，37，1： | 3 |
| 3 | 应用微阵列技术筛选PS1TP1基因转染细胞差异表达基因显示文摘阐明乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白反式激活蛋白1(PS1TP1)的表达对于肝细胞的基因表达谱的影响。应用基因芯片技术对于pcDNA3.1()和pcDNA3.1()PS1TP1分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析。以肝癌细胞系HepG2基因作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增PS1TP1基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1()PS1TP1。以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总RNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1()的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较。在4096个基因表达谱的筛选中,发现有8个基因表达水平显著上调,14个基因表达水平显著下调。PS1TP1基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响。DNA芯片技术是分析反式调节靶基因的有效技术途径。 | 纪冬 成军 郭江 刘妍 王琳 郭风劲 | 2005 | 中国病毒学2005，20，3： | 1 |
| 4 | 噬菌体展示技术在HBV前-S1蛋白反式激活基因1启动子DNA的结合蛋白筛选中的应用显示文摘目的应用噬菌体展示技术筛选HBV前-S1蛋白反式激活基因1(PS1TP1)的启动子DNA结合蛋白,进一步阐述PS1TP1在慢性乙型肝炎发病机制中的作用。方法根据GenBank中的PS1TP1启动子DNA序列设计引物,运用PCR技术以人基因组DNA为模板,扩增获得PS1TP1启动子的DNA片段,并通过亚克隆方法构建真核报告载体pCAT3-PS1TP1p后转染HepG2细胞系,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,以验证所获得的DNA片段具有启动子活性;将PS1TP1启动子DNA片段进行固相化,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,将所获得的噬斑裂解液进行PCR扩增,测序后进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索。结果 pCAT3-PS1TP1p瞬时转染的HepG2细胞中CAT表达活性是对照组(pCAT3-Basic空载体)的32.9倍,是pCAT3-promoter的4.2倍,提示所获得的DNA片段具有启动子活性;经4轮筛选共得到阳性克隆18个,经PCR扩增、测序,并经生物信息学分析后筛选出PS1TP1的启动子DNA结合蛋白编码基因共15个。结论 PCR扩增后所获得的PS1TP1启动子DNA片段具有顺式激活下游基因表达的作用,为研究PS1TP1启动子功能奠定了基础;噬菌体展示筛选结果提示PS1TP1可能参与了细胞周期调节、MAPK信号转导通路,并且有可能在辅助性T细胞亚群的发育和B细胞分化过程中发挥作用。 | 纪冬 成军 韩萍 邵清 陈国凤 | 2012 | 中华实验和临床感染病杂志(电子版)2012，6，4： | 1 |
| 5 | 乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白5基因的克隆化研究显示文摘目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白反式激活新基因PS1TP5的cDNA,并应用生物信息学技术初步探讨其结构及功能。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术以HepG2细胞的cDNA为模板扩增PS1TP5,以pGEM-T载体进行TA克隆,通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定,再将其亚克隆到真核表达载体pcDNATM3.1/myc-HisA,通过PCR、限制性酶切分析进行鉴定,并应用生物信息学技术初步分析其物理化学性质、蛋白质结构和功能。结果PCR成功扩增出PS1TP5基因,并将其分别克隆进pGEM-T和pcDNATM3.1/myc-HisA载体,经PCR、限制性酶切鉴定后测序证实。因其可以被前-S1蛋白反式激活,故命名为前-S1反式激活蛋白5(PS1TP5),已在GenBank中注册,注册号AY427953。生物信息学分析确定其ORF为438个核苷酸(nt),编码产物为145个氨基酸残基(aa)。结论发现了HBV前-S1蛋白反式激活新基因PS1TP5,构建了pcDNATM3.1/myc-HisA真核表达载体,为进一步研究其生物学功能及慢性乙型肝炎发病机制创造了条件。 | 张健康 郭江 成军 王丹琼 赵龙凤 伦永志 蓝贤勇 洪源 毛羽 | 2006 | 解放军医学杂志2006，31，5： | 0 |
| 6 | 应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选PS1TP5反式激活相关基因显示文摘目的构建乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活基因5(PS1TP5)的反式激活相关基因差异表达的cDNA,克隆PS1TP5蛋白反式激活相关基因。方法以PS1TP5表达质粒pcDNA3.1(-)-myc-his(A)-PS1TP5转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建人PS1TP5蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到70个200~1 000 bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得24种编码基因,其中1个为未知功能的新基因,电子拼接后命名为HBV PS1TP5TP1(乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白5反式激活蛋白1),GenBank注册号DQ487761。结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因。PS1TP5与人类免疫调节、物质代谢、信号转导、肝纤维化形成、肿瘤发生发展有密切关系。为进一步研究HBV前-S1蛋白的功能提供了新的线索。 | 张健康 刘春燕 成军 郭江 赵龙凤 洪源 毛羽 | 2009 | 胃肠病学和肝病学杂志2009，18，11： | 0 |
| 7 | 应用抑制性消减杂交技术克隆PS1TP1的反式激活基因显示文摘目的 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白(preS1)反式激活蛋白1(PS1TP1)的相关基因cDNA消减文库,克隆PS1TP1反式激活相关基因,以期发现PS1TP1蛋白反式激活作用的靶位点.方法 以PS1TP1表达质粒PcDNA3.1(-)-PS1TP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;提取mRNA并逆转录为cDNA,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库.结果 文库扩增后得到90个阳性克隆,随机挑选43个克隆测序,并进行同源性分析,获得12种编码基因,其中10个为已知功能基因,另外2个为未知功能序列.结论 成功构建PS1TP1反式激活的相关基因cDNA消减文库,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定基础.为进一步研究PS1TP1蛋白的功能及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法. | 黄辉煌 纪冬 王嗣予 徐婉珍 贾志远 李克 | 2011 | 中华实验和临床病毒学杂志2011，25，3： | 0 |
| 8 | 抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2的反式激活基因显示文摘HBV为带包膜的嗜肝DNA病毒属,其基因组由松弛环状、部分双链DNA(rcDNA)组成。负链较长,约为3200个核苷酸(nt),其5’端共价结合病毒多聚酶;正链较短,长度可变,为1700~2800nt,在其5’端有寡聚核糖核苷酸帽。HBV基因组具有4个开放读码框(ORF),通过不同的起始密码子(ATG)编码至少7个蛋白,包括3个表面抗原: | 郭江 成军 张黎颖 纪冬 赵龙凤 刘妍 高学松 | 2008 | 中华传染病杂志2008，26，5： | 0 |
| 9 | 乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5在酵母细胞中的表达显示文摘目的在真核生物酵母细胞中表达乙型肝炎病毒前S1蛋白反式激活基因5(PS1TP5)。方法以HepG2细胞来源的mRNA为模板,经RT-PCR法扩增PS1TP5基因,克隆到pGEM-T载体中,并测序鉴定,酶切回收后连接到酵母表达质粒pGBKT7中,并转化酵母AH109,色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落,提取酵母蛋白质,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,以明确PS1TP5是否可在其中表达。结果成功扩增出PS1TP5,测序鉴定符合基因库报告序列,酶切回收的PS1TP5基因片段成功克隆入酵母表达载体pGBKT7,并转化入酵母细胞AH109中,Western免疫印迹显示该基因在酵母细胞中成功表达,表达产物相对分子质量为36950。结论成功构建了PS1TP5酵母表达载体,并在酵母细胞中表达。 | 张健康 成军 郭江 伦永志 王丹琼 赵龙凤 洪源 毛羽 | 2007 | 中华传染病杂志2007，25，11： | 0 |
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