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| 1 | 皮肤附属器汗腺发育及功能的机制研究显示文摘皮肤完美再生是烧创伤后皮肤愈合过程中难以解决的临床难题,所谓完美再生就包括了汗腺功能的恢复。作为皮肤附属器之一,汗腺在维持机体体温和内环境稳态中发挥重要作用,因此研究汗腺发育及功能具有重大科学和临床意义。汗腺源自胚胎期的外胚层,目前的研究发现其发育受到Wnt、Eda、Shh、Bmp等通路的调控,但具体的调控机制尚有待深入探讨。汗腺的功能主要通过分泌细胞完成,即明细胞和暗细胞,这两种细胞均表达有大量的离子通道,这些离子通道共同参与了汗腺发育及汗液分泌过程。类胆碱能刺激通过第二信使Ca^2+、Na^-+K^+-Cl^-共转运模型这两种信号激发汗液的分泌,但分子机制尚未明确。该文旨在总结近期汗腺发育及汗液分泌的相关研究,为皮肤愈合过程中的汗腺再生提供研究基础。 | 刘煜凡 黄沙 付小兵 | 2020 | 生命科学2020，32，3： | 9 |
| 2 | 生物三维打印类细胞外基质硬度对骨髓间充质干细胞向皮肤附属器细胞分化的影响显示文摘目的观察生物三维打印类细胞外基质(ECM)硬度对骨髓间充质干细胞(BMSC)向皮肤附属器细胞分化的影响。方法(1)分别将1 g海藻酸钠和4 g明胶、3 g海藻酸钠和8 g明胶混匀,混合物分别溶于100 mL超纯水中,配制2种海藻酸钠-明胶复合水凝胶,分别命名为1A4G水凝胶、3A8G水凝胶,用于后续实验。观察2种水凝胶室温下、4℃冷凝15~30 min(冷凝条件下同)后、冷凝且用25 g/L氯化钙溶液交联(交联条件下同)后、冷凝后且用生物三维打印机(三维打印仪器下同)进行三维打印且交联后形态。取2种水凝胶冷凝并交联后,采用杨氏模量测定仪检测杨氏模量(硬度),样本数为3。取2种水凝胶交联并冷冻干燥,用扫描电子显微镜观察其孔隙结构。取2种水凝胶交联并冷冻干燥,用无水乙醇置换法检测孔隙率,样本数为3。(2)从20只1周龄雌雄不限C57BL/6小鼠股骨和胫骨中分离培养BMSC,取第2代细胞进行实验。分别将1.0×107个/mL的BMSC单细胞悬液与1A4G水凝胶、3A8G水凝胶以1∶9的体积比充分混匀,制备载BMSC的1A4G水凝胶、载BMSC的3A8G水凝胶,进行三维打印,1 mL载细胞水凝胶(打印用量下同)打印1块,交联后加入间充质干细胞(MSC)专用培养基培养。根据水凝胶不同,将打印块分为1A4G组和3A8G组。取2组打印块各1块,培养7 d,采用细胞活/死试剂盒计数50倍视野下活、死细胞。取2组打印块各9块,另将9孔用2 mL MSC专用培养基培养的每孔1.0×106个BMSC设为二维培养组。分别于培养1、3、5 d,1A4G组与3A8G组各取3块打印块、二维培养组取3孔细胞,用细胞计数试剂盒8法检测培养液中吸光度值,以此表示细胞增殖活性。(3)同实验(2)制备载BMSC的1A4G水凝胶、载BMSC的3A8G水凝胶各10 mL,分别加入从10只新生1 d雌雄不明C57BL/6小鼠提取的足趾垫匀浆液各0.5 mL混匀进行三维打印及交联,加入MSC专用培养基培养3 d,更换为汗腺专用培养基培养。根据水凝胶不同,将打印块分为1A4G组和3A8G组。汗腺专用培养基培养7 d,采用免疫荧光法检测2组打印块中细胞的上皮细胞表面标志物细胞角蛋白5(CK5)和CK14、汗腺细胞表面标志物CK18和钠钾ATP酶(NKA)、毛囊细胞表面标志物CK17和碱性磷酸酶(ALP)蛋白表达,实时荧光定量反转录PCR法检测2组打印块中细胞的CK5、CK14、CK18、NKA(检测ATP1a1转录本)、CK17、ALP mRNA表达(样本数为3)。对数据行独立样本t检验、Fisher确切概率法检验、析因设计方差分析及Bonferroni法。结果(1)与3A8G水凝胶比较,1A4G水凝胶室温下黏度稍低、流动性稍好。2种水凝胶冷凝后均呈凝胶状,在此基础上,交联后形状均匀规则,经三维打印且交联后为固态的纵横交错的圆柱块。1A4G水凝胶杨氏模量为(52±6)kPa,明显低于3A8G水凝胶的(218±5)kPa(t=40.470,P<0.01)。2种水凝胶孔隙结构相似,横断面均呈多孔网状结构;2种水凝胶的孔隙率相近(t=0.930,P>0.05)。(2)培养7 d,1A4G组和3A8G组打印块中活、死细胞分布相近(P>0.05),绝大部分为活细胞。培养1、3、5 d,1A4G组和3A8G组打印块及二维培养组培养液中吸光度值两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与组内培养1 d比较,1A4G组、3A8G组打印块培养3、5 d培养液中吸光度值均明显升高(P<0.05或P<0.01),二维培养组细胞培养5 d培养液中吸光度值明显升高(P<0.01);与组内培养3 d比较,1A4G组、3A8G组打印块及二维培养组细胞培养5 d培养液中吸光度值均明显升高(P<0.01)。(3)汗腺专用培养基培养7 d,2组打印块中细胞均可见CK5、CK14、CK18、NKA、CK17、ALP蛋白表达。汗腺专用培养基培养7 d,2组打印块中细胞的CK5、CK14、CK18、NKA mRNA表达量相近(t=0.362、0.807、0.223、1.356,P>0.05);3A8G组打印块中细胞的CK17、ALP mRNA表达量分别为1.96±0.21、55.57±11.49,均明显高于1A4G组的1.05±0.42、2.01±0.27(t=3.333、8.074,P<0.05或P<0.01)。结论1A4G水凝胶和3A8G水凝胶三维培养的BMSC均有向汗腺细胞分化的趋势,但3A8G水凝胶三维培养的BMSC向毛囊细胞分化的趋势比1A4G水凝胶明显。提示相对高的生物三维打印类ECM硬度,不仅有利于BMSC向汗腺细胞分化,还有利于其向毛囊细胞分化。 | 恩和吉日嘎拉 张熠杰 李建军 姚斌 宋薇 黄沙 付小兵 | 2020 | 中华烧伤杂志2020，36，11： | 3 |
| 3 | 3D-printable supramolecular hydrogels with shear-thinning property: fabricating strength tunable bioink via dual crosslinking显示文摘3-dimensional(3D)bioprinting technology provides promising strategy in the fabrication of artificial tissues and organs.As the fundamental element in bioprinting process,preparation of bioink with ideal mechanical properties without sacrifice of biocompatibility is a great challenge.In this study,a supramolecular hydrogel-based bioink is prepared by polyethylene glycol(PEG)grafted chitosan,α-cyclodextrin(α-CD)and gelatin.It has a primary crosslinking structure through the aggregation of the pseudo-polyrotaxane-like side chains,which are formed from the host-guest interactions betweenα-CD and PEG side chain.Apparent viscosity measurement shows the shear-shinning property of this bioink,which might be due to the reversibility of the physical crosslinking.Moreover,withβ-glycerophosphate at different concentrations as the secondary crosslinking agent,the printed constructs demonstrate different Young's modulus(p<0.001).They could also maintain the Young's modulus in cell culture condition for at least 21 days(p<0.05).By co-culturing each component with fibroblasts,CCK-8 assay demonstrate cellular viability is higher than 80%.After bioprinting and culturing,immunofluorescence staining with quantification indicate the expression of Ki-67,Paxillin,and N-cadherin is higher in day 14 than those in day 3(p<0.05).Oil red O and Nissl body specific staining reflect strength tunable bioink may have impact on the cell fate of mesenchymal stem cells(p<0.05).This work might provide new idea for advanced bioink in the application of re-establishing complicated tissues and organs. | Tian Hu Xiaoliang Cui Meng Zhu Man Wu Ye Tian Bin Yao Wei Song Zhongwei Niu Sha Huang Xiaobing Fu | 2020 | Bioactive Materials2020，5，4： | 3 |
| 4 | m^6A RNA甲基化修饰参与干细胞多向分化调控的研究进展显示文摘m^6A修饰是RNA中普遍存在的甲基化修饰方式之一,属于转录后水平的表观遗传调控。m^6A RNA甲基化修饰包括编写、擦除和读取过程,通过参与干细胞多向分化,从而影响多种生物学功能。近年来研究发现,无论在生理或者病理状态下,m^6A修饰均可以通过调控干细胞的自我更新和分化,从而改变干细胞的复制能力和分化方向,进而影响组织成熟过程和疾病的发生与进展。本文对m^6A在RNA中的修饰机制进行阐述,重点对m^6A修饰参与几种干细胞的自我更新和多向分化调控展开论述。 | 张旭 秦文 刘佳 金作林 | 2020 | 中华口腔医学研究杂志(电子版)2020，14，4： | 3 |
| 5 | 干细胞在汗腺再生中的应用研究进展显示文摘汗腺作为皮肤的重要附属器官之一,对体温调节和内环境稳态维持起重要作用。烧伤后汗腺遭到破坏,无法进行自我修复,最终遗留排汗障碍问题,而目前的临床治疗策略均无法有效恢复损伤汗腺的功能。因此亟待寻求能够促进汗腺再生并恢复其正常功能的治疗手段。干细胞来源广泛、免疫原性低、增殖能力强且具有多向分化潜能等优势,已成为再生医学领域的研究热点。近年来已有多种干细胞被诱导分化为具有一定分泌功能的汗腺样组织,为临床烧伤后汗腺再生提供了治疗方向。本文主要从不同环境中干细胞转化为汗腺细胞的方式及其影响因素方面,就干细胞在汗腺再生中的应用研究进展进行综述。 | 张静娟 王茂英 赵洁 姜笃银 | 2022 | 中华烧伤与创面修复杂志2022，38，3： | 2 |
| 6 | mRNA m6A甲基化修饰对干细胞生物学特性的影响显示文摘背景:干细胞具有自我更新和多能定向分化潜能,是机体维持生理功能所必须的,并在多种疾病发生发展以及疾病治疗与器官移植等方面具有重要意义。近年研究发现m6A甲基化修饰可调控干细胞生物学特性在多种疾病中发挥重要作用。目的:文章主要就m6A甲基化修饰对干细胞的自我更新、定向分化以及其免疫学特性等生物学过程的最新研究进展进行综述。方法:以“stem cells,m6A,RNA methylation,biological characteristics,self-renewal,proliferation,differentiation,immunization”为英文检索词,以“干细胞、m6A、甲基化、生物学特性、自我更新、增殖、分化、免疫”为中文检索词,检索Pub Med、Web of Science以及中国知网数据库1955-2022年的相关文献,最后纳入88篇文献进行综述。结果与结论:m6A作为真核生物m RNA中丰度最高的表观遗传学修饰,也是当前表观遗传学研究的热点,由甲基转移酶、去甲基化酶和甲基阅读蛋白组成,已成为一种重要的转录组标记。m6A甲基化修饰调控干细胞生物学特性方面得出以下结论:(1)m6A甲基化修饰可通过相关的酶靶向调节细胞周期转化、增殖相关分子的转录后翻译、DNA复制过程中关键酶的表达、向特定细胞的分化、免疫检查点分子的表达以及对放化疗药物的敏感性等,进而在治疗恶性疾病、延缓病情、改善预后发挥着关键作用。(2)m6A相关酶分子与干细胞的增殖与自我更新、定向分化以及免疫调节方面的生物学特性关系密切,可作为药物治疗的靶标。(3)m6A甲基化修饰对人类疾病的研究尚处于基础研究阶段,且部分恶性疾病的m6A修饰机制尚未深入探究清楚,随着表观遗传学的发展,RNA m6A修饰在治疗恶性疾病以及临床转化过程中有望实现新的突破。 | 韩韦钰 赵永超 赵然尊 | 2023 | 中国组织工程研究2023，27，10： | 2 |
| 7 | Stiffness-mediated mesenchymal stem cell fate decision in 3D-bioprinted hydrogels显示文摘Background:Hydrogels with tuneable mechanical properties are an attractive material platform for 3D bioprinting.Thus far,numerous studies have confirmed that the biophysical cues of hydrogels,such as stiffness,are known to have a profound impact on mesenchymal stem cell(MSC)differentiation;however,their differentiation potential within 3D-bioprinted hydrogels is not completely understood.Here,we propose a protocol for the exploration of how the stiffness of alginate–gelatin(Alg-Gel)composite hydrogels(the widely used bioink)affects the differentiation of MSCs in the presence or absence of differentiation inducing factors.Methods:Two types of Alg-Gel composite hydrogels(Young’s modulus:50 kPa vs.225 kPa)were bioprinted independently of porosity.Then,stiffness-induced biases towards adipogenic and osteogenic differentiation of the embedded MSCs were analysed by co-staining with alkaline phosphatase(ALP)and oil red O.The expression of specific markers at the gene level was detected after a 3-day culture.Results:Confocal microscopy indicated that all tested hydrogels supported MSC growth and viability during the culture period.Higher expression of adipogenic and osteogenic markers(ALP and lipoprotein lipase(LPL))in stiffer 3D-bioprinted matrices demonstrated a more significant response of MSCs to stiffer hydrogels with respect to differentiation,which was more robust in differentiation-inducing medium.However,the LPL expression in stiffer 3D-bioprinted constructs was reduced at day 3 regardless of the presence of differentiation-inducing factors.Although MSCs embedded in softer hydrogels to some extent proceeded toward adipogenic and osteogenic lineages within a few days,their differentiation seemed to be slower and more limited.Interestingly,the hydrogel itself(without differentiation-inducing factors)exhibited a slight effect on whether MSCs differentiated towards an adipogenic or an osteogenic fate.Considering that the mechanoregulated protein Yes-associated protein(YAP)is involved in MSC fate decisions,we further found that inhibition of YAP significantly downregulated the expression of ALP and LPL in MSCs in stiffer constructs regardless of the induced growth factors present.Conclusions:These results demonstrate that the differentiation of MSCs in 3D-bioprinted matrices is dependent on hydrogel stiffness,which emphasizes the importance of biophysical cues as a determinant of cellular behaviour. | Yufan Liu Zhao Li Jianjun Li Siming Yang Yijie Zhang Bin Yao Wei Song Xiaobing Fu Sha Huang | 2020 | Burns & Trauma2020，8，1： | 2 |
| 8 | 猪m^6A去甲基化酶FTO、ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌F18感染抗性的关系分析显示文摘为了探讨猪6-甲基腺嘌呤(m^6A)去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRNA表达差异,同时分别利用F18ab、F18ac大肠杆菌菌体刺激和内毒素LPS诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),检测FTO、ALKBH5基因表达变化。结果表明,FTO、ALKBH5基因在抗性型个体十二指肠和空肠中的表达量均极显著或显著高于敏感型个体(P<0.01,P<0.05);不同F18大肠杆菌菌体刺激IPEC-J2细胞后,FTO基因表达水平均无显著变化(P>0.05),而ALKBH5基因在F18ac刺激后表达量显著上调(P<0.05);LPS诱导4 h时,FTO和ALKBH5基因表达量均显著上调(P<0.05)。本研究在细胞和个体水平上初步验证并发现了m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌感染仔猪密切相关,为今后深入研究RNA去甲基化修饰在仔猪细菌性腹泻调控中的作用机制提供了理论基础。 | 齐晓艺 杨荔 吴正常 包文斌 吴圣龙 | 2020 | 中国畜牧兽医2020，47，9： | 1 |
| 9 | 皮肤病中编码RNA的m6A修饰显示文摘N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)是真核生物mRNA上最主要的转录后修饰,受甲基转移酶、去甲基酶和m6A结合蛋白调控,对mRNA的剪接、翻译、降解起重要调节作用。皮肤病尤其免疫性皮肤病和皮肤肿瘤发病机制复杂,治疗困难,严重影响患者的生活质量。近年来研究发现m6A及其调控蛋白可影响众多皮肤病的发生和发展。m6A修饰可参与皮肤附件的发育,包括毛囊、汗腺形成。在黑色素瘤、皮肤鳞状细胞癌、梅克尔细胞癌、银屑病等多种皮肤病中,m6A修饰水平显著改变,并影响细胞增殖、分化、迁移等多种生物学过程。m6A及其调控蛋白可能成为皮肤病潜在的分子标志或治疗靶点,在皮肤病的早期诊断、疗效判断、预后预测、基因治疗等方面有广阔的临床应用前景。 | 鄢卓贤 梁鹏飞 | 2022 | 中南大学学报(医学版)2022，47，8： | 0 |
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