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| 1 | miR-186过表达慢病毒载体的构建及鉴定显示文摘目的:构建miR-186过表达慢病毒载体并包装慢病毒,探讨miR-186在人胚胎肾细胞(HEK)293T细胞系中的感染效率和表达水平。方法:以Hsa-miR-186前体序列为模板,设计并合成引物,PCR法扩增pre-miR-186基因序列,并将其克隆到携带EGFP/Puromycin的慢病毒载体FV040中,经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切及测序鉴定后获得重组慢病毒载体。利用Lipofectamine2000将重组慢病毒质粒FV040Vector和FV040miR-186分别与辅助质粒通过共转染至HEK293T细胞中,48h后收集慢病毒,以FV040Vector慢病毒作为对照组,FV040miR-186作为实验组,分别感染HEK293T细胞。感染48h后,观察HEK293T细胞中绿色荧光的分布情况,并采用实时荧光定量PCR法检测miR-186的表达水平。结果:测序分析,miR-186过表达慢病毒与GenBank上公布的miR-186序列完全一致。与对照组(0.838 7±0.145 6)比较,实验组HEK293T细胞中miR-186表达水平(12.640 0±0.788 4)明显升高(t=14.72,P<0.01),约为对照组的15.07倍。结论:成功构建miR-186过表达慢病毒载体并包装出慢病毒,miR-186慢病毒成功感染HEK293T细胞,miR-186表达水平在HEK293T细胞中明显升高。 | 李胜男 王梦旭 胡伟东 陈少凤 陈杏兰 李友 | 2019 | 吉林大学学报(医学版)2019，45，5： | 3 |
| 2 | circRNA在肝细胞癌致病机制中的研究进展显示文摘环状RNA(circRNA)是近几年来国内外医学界研究的热点,是一类广泛存在于真核细胞中天然呈封闭环状的特殊非编码RNA分子。circRNA在许多癌症中发挥着重要的调控作用,它在癌症中致病的主要机制是通过与微小RNA(miRNA)的竞争性结合,解除微小RNA对下游相对应靶基因的抑制作用,也有一定数量的circRNA可以通过调节细胞干性、上皮间充质转化(EMT)以及细胞的自噬水平,从而对癌症的发生发展进行调控,尤其是在肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移方面扮演着至关重要的角色。现就circRNA在肝细胞癌致病机制中的研究进展作一综述。 | 张亚 浦涧 | 2021 | 右江民族医学院学报2021，43，5： | 2 |
| 3 | 环状RNA circ-MFN2在胰腺癌中的表达及其临床意义显示文摘目的探究环状RNA-线粒体融合蛋白2(circular RNA mitochondrial fusin 2,circ-MFN2)在胰腺癌中的表达,分析其与患者临床病理特征及预后间的相关性。方法采用qRT-PCR法检测55例胰腺癌患者的癌组织及血清中circ-MFN2 miRNA的表达,分析其与患者临床病理特征及预后间的相关性,计算circ-MFN2 miRNA表达诊断胰腺癌的敏感度、特异度和诊断准确率。根据ROC曲线分析其作为胰腺癌早期诊断生物标志物的效能。结果胰腺癌组织及血清中circ-MFN2 miRNA均呈高表达,分别与癌旁组织及健康对照组血清比较差异均具有统计学意义(均P<0.05)。胰腺癌组织中circ-MFN2 miRNA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理学类型及肿瘤部位无关(P>0.05),但与CA19-9水平、TNM分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。circMFN2 miRNA表达诊断胰腺癌的敏感度、特异度和准确率分别为72.7%、70.9%及83.6%,均分别高于CA19-9的54.5%、50.9%和52.7%(均P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示circ-MFN2 miRNA高表达胰腺癌患者的中位生存时间显著短于低表达者(9.1个月比22.3个月,P<0.05)。血清circ-MFN2 miRNA作为诊断胰腺癌血清生物标志物的ROC曲线下面积为0.861[95%CI为(0.775,1.157),P=0.000]。Cox多因素分析显示,circ-MFN2 miRNA表达及淋巴结转移是胰腺癌患者预后的独立危险因素。结论circ-MFN2 miRNA在胰腺癌组织中呈高表达,且与患者临床病理特征及预后密切相关,有望成为预测胰腺癌预后的新型分子标志物。 | 李四桥 常清潭 刘海潮 刘少朋 | 2021 | 中国普外基础与临床杂志2021，28，6： | 1 |
| 4 | 下调miR-196b靶向核凋亡诱导因子1调控肝癌细胞生长和凋亡的机制显示文摘目的探讨miR-196b靶向核凋亡诱导因子1(NAIF1)调控肝癌细胞生长和凋亡的机制。方法Real-time PCR检测miR-196b在肝癌细胞HuH-7、SNU-449、HepG2、SMCC7721和人正常肝细胞HL7702中的表达差异。取肝癌细胞HepG2,分成Control(空白对照)、Anti-NC(转染inhibitor control)、Anti-miR-196b(转染miR-196b inhibitor)、si-NC(转染siRNA control)、si-NAIF1(转染NAIF1 siRNA)、Anti-miR-196b+si-NAIF1(共转染miR-196b inhibitor、NAIF1 siRNA)和Anti-miR-196b+si-NC(共转染miR-196b inhibitor、siRNA control)组,MTT测定增殖变化,平板克隆实验检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测Bax、C-caspase-3蛋白表达变化。靶基因预测软件预测NAIF1可能为miR-196b的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。计量资料两组间比较用t检验;多组间比较用单因素方差分析,进一步两两比较用SNK-q检验。结果肝癌细胞HuH-7、SNU-449、HepG2、SMCC7721和人正常肝细胞HL7702中miR-196b表达水平分别为1.85±0.16、1.63±0.12、2.36±0.25、1.92±0.13、1.00±0.09,组间比较差异有统计学意义(F=29.05,P<0.001)。与Anti-NC组比较,Anti-miR-196b组细胞中miR-196b表达水平(1.02±0.10 vs 0.42±0.03,P<0.05),细胞增殖(0.30±0.05 vs 0.20±0.02,P<0.05)、克隆能力(119.54±11.82 vs 64.35±6.97,P<0.05)均下降,细胞凋亡率[(4.26±0.35)%vs(22.30±2.09)%,P<0.05)]升高,细胞中Bax蛋白(0.30±0.05 vs 0.69±0.08,P<0.05)、C-caspase-3蛋白(0.21±0.04 vs 0.63±0.05,P<0.05)相对表达量增多。与si-NC组比较,si-NAIF1组肝癌细胞增殖能力升高(0.31±0.04 vs 0.46±0.05,P<0.05),克隆能力增加(118.47±8.38 vs 138.9±9.66,P<0.05),细胞凋亡率降低[(4.12±0.40)%vs(1.23±0.12)%,P<0.05],NAIF1(0.17±0.02 vs 0.10±0.01,P<0.05)、Bax(0.29±0.03 vs 0.18±0.02,P<0.05)、C-caspase-3(0.20±0.03 vs 0.12±0.01,P<0.05)蛋白水平也下降。与Anti-miR-196b+si-NC组比较,Anti-miR-196b+si-NAIF1组肝癌细胞增殖能力升高(0.21±0.03 vs 0.28±0.02,P<0.05),克隆能力增加(66.35±5.20 vs 97.12±8.23,P<0.05),细胞凋亡率降低[(21.14±1.32)%vs(9.60±1.11)%,P<0.05]NAIF1(0.52±0.06 vs 0.30±0.04,P<0.05)、Bax(0.67±0.06 vs 0.28±0.03,P<0.05)、C-caspase-3(0.60±0.04 vs 0.22±0.05,P<0.05)蛋白水平也下降。结论下调miR-196b靶向负调控NAIF1表达抑制肝癌细胞生长并诱导凋亡。 | 肖二辉 宁会彬 康月花 殷辉 马力 毛重山 赵岩 尚佳 | 2020 | 临床肝胆病杂志2020，36，10： | 1 |
| 5 | 肝癌干细胞分泌外泌体对肝癌恶性生物学行为调控研究显示文摘目的探讨肝癌干细胞通过分泌外泌体对肝癌恶性生物学行为进行调控的潜在可能性。方法利用免疫磁珠分选技术,对HepG2肝癌细胞中的干性细胞亚群进行分选,富集CD133+肝癌细胞,将其分为对照组与实验组。分别应用CD133-HepG2细胞培养上清液、CD133+HepG2细胞培养上清液与正常培养基按照相同比例配置,培养肝癌HepG2细胞系。比较两组的细胞增殖、细胞侵袭能力。提取上清液中外泌体进一步分析其作为诱导作用介质的可能性。结果成功分离得到CD133+HepG2肝癌细胞,经Western-Blot及Real-time PCR鉴定结果显示,CD133蛋白显著高表达,CD133基因显著扩增,肝癌干细胞被显著富集。实验组应用含有CD133+HepG2肝癌细胞上清液培养肝癌细胞系HepG2,其细胞增殖、侵袭能力均显著增强(P<0.05)。本研究成功在CD133+HepG2肝癌细胞上清液中提取出外泌体。结论外泌体作为细胞间信息通讯的重要载体,参与了肝癌细胞信号传递过程,而肝癌干细胞所分泌的外泌体因其携带干性相关调控信号,其对周围肝癌细胞的发生、发展起到正向调控作用,促进肝癌细胞的恶性增殖能力。 | 张跃 韩涛 郑振东 韩磊 | 2019 | 临床军医杂志2019，47，12： | 0 |
| 6 | miRNA-375在肝癌患者血清表达和疗效评估的研究价值显示文摘目的全面研究mi RNA-375在肝癌患者血清之中的具体含量,并分析其表达情况和临床的疗效评估参考价值。方法选择该院2019年2—9月40例前来治疗的肝癌患者为观察组,同时选择同期40例来该院前来治疗的肝硬化等肝部疾病患者设置为对照组,mi RNA使用芯片进行检测,确定出肝癌与良性肝脏肿瘤之中mi RNA的表达差异,使用荧光测量方式对肝脏肿瘤检测。结果 mi RNA-375在观察组患者的血清和血液组织之中的表达量较高,其中,对照组患者的表达量是0.656(2-ΔC1),观察组是2.987(2-ΔC1),两组之间对比差异有统计学意义(t=5.898,P<0.001),发现血清之中的mi RNA-375表达水平高低与患者的TMN分期,癌组织分化有关联,差异有统计学意义(P<0.05)。mi RNA-375的含量和表达水平高低与患者的年龄和性别之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 mi RNA-375在肝癌患者的血清中表达含量增加,可以进行肝癌的疾病预后评判指标。 | 杨庆余 韦志平 张胥磊 濮阳娟 费勇 吴亮 | 2020 | 系统医学2020，5，18： | 0 |
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