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| 1 | 应用基因编辑技术探索建立中枢神经系统动静脉畸形小鼠模型显示文摘目的采用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠Alk1基因,探讨条件性敲除Alk1建立中枢神经系统动静脉畸形动物模型的可行性。方法利用CRISPR/Cas9技术在小鼠Alk1基因的特定位点插入两个Lox P序列;经传代并与SM22-Cre小鼠交配后培育出Alk1^(2Lox P/2Lox P)/Cre目标小鼠。该目标小鼠8周龄时通过他莫昔芬腹腔注射激活Cre重组酶的表达,从而条件性敲除Alk1基因诱导脑动静脉畸形的生成。2周后取小鼠脑组织标本,进行苏木精-伊红染色和病理分析。结果 7只目标小鼠中,2只脑组织病理切片发现管腔大小不一的异常血管病灶。结论条件性敲除Alk1基因可初步建立中枢神经系统动静脉畸形动物模型。 | 徐宏治 徐铭 陈峻叡 秦智勇 林小凤 陈衔城 | 2016 | 中国临床神经科学2016，24，2： | 2 |
| 2 | CRISPR/Cas9联合Cre-Loxp系统建立VASN条件敲除的小鼠肝细胞系显示文摘目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株。方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CRISPR/Cas9重组载体;设计构建VASN上下游分别带有Loxp序列和旁侧同源序列的供体载体donor DNA质粒;将3个质粒共转染至小鼠肝细胞AML12中,分离单克隆,提取基因组DNA,经PCR及测序鉴定获得稳定敲入Loxp序列的单克隆细胞株AML12-Loxp;将pALB-Cre质粒转染至AML12-Loxp,筛选建立敲除VASN基因的细胞系。结果:成功构建2个靶向敲除VASN基因的pX459-gRNA-VASN-1和pX459-gRNAVASN-2重组载体及一个供体载体;转染药筛后获得12个单细胞克隆,经测序,5个单克隆细胞实现VASN基因上下游精确敲入Loxp序列;同源重组敲入效率为41.6%;pALB-Cre质粒转染后获得20个单细胞克隆,经PCR和测序获得12个VASN基因敲除的单克隆细胞,敲除效率为60%。结论:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统成功构建了VASN基因敲除的AML12细胞,为后续体外研究VASN在肝细胞中的功能及在动物体内实现VASN的条件性敲除奠定了分子基础。 | 甘暨 杨丽超 张起 孙俊铭 张俊 何敏 | 2023 | 广西医科大学学报2023，40，2： | 0 |
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