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| 1 | 猪腹泻性病毒病荧光定量PCR鉴别诊断方法研究进展显示文摘荧光定量PCR方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好、快速高效、定量准确、全封闭反应等优点,越来越受到广大兽医相关工作者的关注,在动物疾病诊断中应用越来越广泛,本文综述了猪腹泻性病毒病荧光定量PCR鉴别诊断方法的研究进展情况,以期为今后猪腹泻性病毒病的诊断和防控工作提供参考。 | 于新友 李天芝 | 2017 | 饲料与畜牧(规模养猪)2017，0，4： | 6 |
| 2 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体双重荧光PCR检测方法的建立显示文摘为了建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪肺炎支原体(Mhp)的双重荧光PCR检测方法,本试验根据NCBI数据库中的PRRSV ORF7和Mhp P36基因,分别设计引物和TaqMan探针,通过优化扩增反应条件,建立PRRSV和Mhp的双重荧光PCR检测方法;分析所建立PCR方法的特异性、敏感性和重复性,并初步应用于临床样品检测。结果显示,25μL PCR反应体系中各引物最佳添加量:PRRSV-F 1.5μL、PRRSV-R 1.0μL、PRRSV-P 0.8μL、Mhp-F 1.2μL、Mhp-R 1.3μL、Mhp-P 0.7μL。优化后的PCR反应程序:50℃反转录20 min,95℃预变性2 min,95℃变性5 s,55℃退火10 s,72℃延伸20 s (此处收集荧光),40个循环。建立的双重荧光PCR方法特异性较好,与其他猪常见病原体无交叉反应;检测PRRSV和Mhp的敏感性分别为4.2拷贝/μL和9.6拷贝/μL;批内和批间变异系数均不高于2%,具有很好的重复性。因此,本试验建立的双重荧光PCR方法可同时检测PRRSV和Mhp,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪支原体肺炎(MPS)的诊断和防控工作提供支持。 | 于新友 李天芝 李书光 刘新江 李振伟 沈志强 肖跃强 | 2023 | 中国兽医杂志2023，59，6： | 2 |
| 3 | 美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测方法的建立及其应用显示文摘美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在我国出现了多种基因亚型毒株混合流行和重组的复杂变化,其引起的猪繁殖与呼吸综合征(PorcineReproductiveand Respiratory Syndrome,PRRS)已成为危害程度仅次于非洲猪瘟的重要疫病。为建立一种快速而敏感性高的美洲型PRRSV检测方法,本研究分析了国内美洲型全基因组序列,利用重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),设计合成特异性引物和探针,优化反应体系和条件,建立美洲型PRRSV实时荧光RPA检测方法,通过特异性、敏感性、重复性试验及田间样品的比对检测,评价该方法的检测能力,并测定和分析了田间阳性样品的ORF5基因序列。结果显示,该方法在42℃、20 min内即可完成检测,最低检测美洲型PRRSV载量为50拷贝/μL,且与欧洲型PRRSV、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应,特异性好;检测50份田间样品该方法的阳性检出率为34%,与实时荧光RT-PCR检测结果的符合率为100%;ORF5序列分析显示检出阳性样品中NADC30-Like毒株占比为88%。结果表明,本研究建立的美洲型PRRSV实时荧光RPA检测方法特异性强、敏感性高,满足PRRSV的快速诊断和流行病学调查。 | 王方洲 孙普 张婧 李平花 马雪青 赵志荀 李凤娟 李国秀 李冬 王健 袁红 曾巧英 刘在新 卢曾军 | 2023 | 病毒学报2023，39，1： | 1 |
| 4 | 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和生物安全显示文摘猪繁殖与呼吸综合征是猪养殖过程中经常出现的接触性传染病,对猪的致死率较高,而且其病毒能够损害猪的免疫功能,使猪更容易遭受其他病毒的入侵,为养殖者带来严重的经济损失。为此,文章分析了猪繁殖与呼吸综合征病毒的传播,并从内外部角度论述了生物安全对猪繁殖与呼吸综合征的作用。 | 刘彩云 | 2018 | 中国畜牧兽医文摘2018，34，2： | 0 |
| 5 | EvaGreen实时荧光PCR检测猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)方法的建立和应用显示文摘目前,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)已成为全球范围内影响较广的猪类重要疾病之一,因此建立快速、有效的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测技术成为预防和控制PRRS传播的关键。在序列分析的基础上,设计特异性引物,建立基于熔解曲线分析的Eva Green实时荧光定量PCR检测PRRSV方法。该方法能够特异性扩增PRRSV,并用经熔解曲线分析产生特异性的熔解峰,而非靶标病毒未产生非特异性扩增;PRRSV的检测灵敏度可达50 copies/μL;批内、批间重复试验中变异系数均在2%以内;对118份临床样品进行检测,阳性率为31.4%,与普通PCR检测结果相符率为100%。结果表明,建立的Eva Green实时荧光定量PCR检测PRRSV方法具有较高的特异性、灵敏度和良好的重复性,可用于临床PRRSV感染的早期诊断及分子流行病学调查。 | 郑晓文 饶品彬 蔡晔 杨宗歧 姜永厚 | 2017 | 江苏农业科学2017，45，9： | 0 |
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