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| 1 | 维吾尔药茶昆仑雪菊ISSR分子标记体系的建立显示文摘研究适用于昆仑雪菊的ISSR-PCR反应体系,建立ISSR分子标记技术评价昆仑雪菊生态多样性体系。采用改良CTAB法、CTAB区室法、改良CTAB区室法、试剂盒法提取昆仑雪菊的新鲜叶片、干花以及种子的DNA;以827为引物,研究浓度、循环数、退火温度对ISSR-PCR反应体系的影响,以不同实验材料检测其适宜性。结果表明,昆仑雪菊新鲜叶片、干花以及种子的DNA的最佳提取方法为改良CTAB区室法,ISSR-PCR反应体系的最适引物浓度为1.0μmol·L-1,退火温度为54.6℃,循环数为30。ISSR-PCR反应体系适用于评价昆仑雪菊的生物多样性。 | 郎乾坤 樊丛照 朱军 李晓瑾 贾晓光 | 2017 | 生物资源2017，39，1： | 3 |
| 2 | 山莨菪ISSR-PCR反应体系的建立与优化显示文摘以山莨菪为实验材料,通过正交设计与单因素两种试验方法对山莨菪ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA浓度,Mg2+,Taq酶,d NTPs及引物)进行4水平优化与筛选。经过PCR扩增结果的比较与分析,确定各因素的最适浓度,建立山莨菪的最佳ISSR-PCR反应体系。结果表明,25μL最佳反应体系为:3.0 mmol/L Mg2+、0.2 mol/L d NTPs、0.4μmol/L引物、0.5 U Taq DNA酶、40 ng DNA、2.5μL 10×Buffer。在最佳优化体系条件下,从100条引物中筛选出13条ISSR扩增引物,并确定各自最佳退火温度。建立的山莨菪ISSR-PCR反应体系,经过11份山莨菪样品检测,证明该体系稳定,可用于山莨菪遗传差异性分析。 | 任梦云 陈彦君 张盾 杜乐山 刘方 关潇 张银东 | 2017 | 分子植物育种2017，15，12： | 2 |
| 3 | 丝瓜ISSR反应体系的优化显示文摘以丝瓜基因组DNA为模板,对ISSR反应中主要5个影响因素Mg^(2+)浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度和DNA模板浓度,建立丝瓜ISSR-PCR反应的体系。根据实验确定的最佳反应体系为:25μL ISSR体系:50 ng DNA,0.2 mmol/L dNTP,1 U Taq酶,0.4μmol/L的单条引物,2.5μL 10×Buffer,2.0 mmol/L Mg^(2+)。在此基础上,对12个引物的退火温度进行优化。最终选用60份丝瓜品种对所确定的扩增体系及扩增程序进行验证,检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、亮度高和重复性好,表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于丝瓜的ISSR分子标记为丝瓜种质资源的鉴定、分类和丝瓜的杂交育种提供参考依据。 | 叶新如 朱海生 温庆放 刘建汀 王彬 陈敏氡 张前荣 | 2018 | 分子植物育种2018，16，5： | 2 |
| 4 | 白背飞虱ISSR-PCR反应体系构建的正交设计优化显示文摘白背飞虱是水稻重要害虫之一.研究采用L16 (45)正交设计优化试验,构建了白背飞虱ISSR最优反应体系,并对引物退火温度和反应循环次数进行了优化.结果表明:白背飞虱ISSR-PCR最优反应体系为2μL 10×PCRBuffer(10 mmol/L Tris-HCl; 50 mmol/L KCl),1.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTPs,0.9μmol/L引物,1U TaqPolymerase和50 ng模板DNA,ddH2O补充至20μL.本研究采用的10条引物的最佳退火温度在51.0~54.0℃间,以引物相应最优退火温度和40次反应循环可获得较好的白背飞虱ISSR-PCR结果. | 谢家楠 郭建军 金道超 | 2014 | 植物保护2014，40，2： | 2 |
| 5 | 花吊丝竹ISSR反应体系的建立与优化显示文摘建立关于花吊丝竹的ISSR-PCR反应体系,为花吊丝竹种质资源鉴定提供理论基础。采用单因素试验法,对影响PCR扩增效果的Mg^(2+)浓度、d NTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度及模板DNA用量等5个PCR反应体系主要成分以及退火温度和循环次数进行分析,并利用建立的优化反应体系和扩增程序对100条候选引物进行筛选。结果表明,适合花吊丝竹的ISSR-PCR反应体系为:20μL的反应液中含3.0 mmol/L Mg^(2+)、0.20 mmol/L d NTPs、1.25 U Taq DNA聚合酶、0.6μmol/L引物、10 ng模板DNA、2μL 10×Buffer、8.55μL dd H_2O。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,52.7℃退火30 s,72℃延伸90 s,40个循环;72℃延伸10 min,4℃保存。建立的花吊丝竹的ISSR-PCR反应体系能够扩增出清晰、多态性较高的条带,且筛选出的16条引物具有高度多态性。表明该体系具有较高的稳定性、重现性和适用性。 | 瞿印权 徐雯 沈露 何天友 施成坤 荣俊冬 陈礼光 郑郁善 | 2017 | 河南农业科学2017，46，7： | 2 |
| 6 | 濒危植物沉水樟ISSR-PCR反应体系的建立与优化显示文摘为从分子水平上探讨濒危物种沉水樟种质资源的保护机制,以其基因组DNA为模版,开展ISSR-PCR反应体系的研究,对各反应因子水平、引物退火温度和循环参数进行优化,确定适于沉水樟ISSR-PCR反应的最佳体系:20 μL反应体系中各反应物的最适含量为模板75 ng、引物0.4μmol/L、dNTP 200 μmol/L、Taq酶1.25 U、Mg2+ 1.5 mmol/L;扩增程序为:94℃预变性7 min; 94℃变性30 s,53.0~58.0℃退火45 s,72℃延伸90 s,45个循环;72℃延伸7 min,4℃保存. | 蔡丽平 梅辉坚 陈奶莲 苗作云 吴鹏飞 邹显花 马祥庆 | 2013 | 西南林业大学学报(自然科学)2013，33，5： | 1 |
| 7 | 烟草五种土传病原菌的多重PCR快速检测显示文摘【目的】建立一种可同时检测烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica)、青枯病菌(Ralstonia solanacearum)、立枯病菌(Rhizoctonia solani)、根腐病菌(Fusarium oxysporum)和根黑腐病菌(Thielaviopsis basicola)5种烟草重要土传病原菌的五重PCR快速检测方法。【方法】筛选5种病原菌的特异性引物组合,通过不同的引物浓度和退火温度对多重PCR体系进行优化,检测体系的灵敏度,并对土壤和植株样品进行测试,验证其实用性。【结果】根据青枯病菌fliC基因、立枯病菌RPB2基因、根腐病菌COI基因以及根黑腐病菌TEF1基因设计特异性引物,并结合已报道的黑胫病菌parA1基因的特异性引物,成功建立5种烟草土传病害的多重PCR检测方法。反应体系(25μL):Sf1/Sr1、Ff1/Fr1、Pf1/Pr1每条引物分别0.3μL,Rf1/Rr1每条引物各1.8μL,TBf1/TBr1每条引物各1μL,2×PCR Mix 12.5μL,退火温度为58℃,灵敏度可达到100 pg/μL。【结论】本研究建立的多重PCR体系能够同时快速检测烟草黑胫病菌、青枯病菌、立枯病菌、根腐病菌和根黑腐病菌以及田间带菌烟草病株和土壤,为田间烟草土传病害的早期诊断提供依据。 | 舒芳玲 范东升 张得平 蓝达愉 林纬 卢燕回 袁高庆 | 2022 | 中国烟草学报2022，28，5： | 0 |
| 8 | 白背飞虱RAPD-PCR反应体系的正交设计优化显示文摘白背飞虱Sogatella furcifera(Horváth)是水稻重要害虫之一。研究采用L16(45)正交设计优化试验,构建了白背飞虱RAPD最优反应体系,并对引物退火温度和反应循环次数进行了优化。结果表明:白背飞虱RAPDPCR最优反应体系为2μL 10×PCR Buffer(10 mmol/L Tris-HCl;50 mmol/L KCl),2.4 mmol/L Mg2+,0.15 mmol/L dNTPs,0.7μmol/L引物,0.8U Taq DNA Polymerase和30 ng模板DNA,ddH2O补充至20μL。本研究采用的10条引物的最佳退火温度在35-39℃间,以引物相应最优退火温度和40次PCR反应循环可获得较好的白背飞虱RAPD-PCR结果。 | 谢家楠 郭建军 金道超 | 2014 | 环境昆虫学报2014，36，3： | 0 |
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