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| 1 | 约氏疟原虫基因条件修饰体系的构建及其应用分析显示文摘目的构建Flp/FRT位点特异重组系统介导的致死型约氏疟原虫基因条件修饰体系,用于疟原虫红前期基因功能的研究。方法构建含有Flp酶基因序列和FRT标记耐药基因的重组质粒,通过Nucleofector电转技术将线性化质粒转染至约氏疟原虫P.yoelii 17XL。经药物筛选并克隆后,利用PCR和核酸探针杂交进行基因型鉴定。经蚊体内发育,启动Flp酶介导的位点特异重组去除药物筛选基因(hDHFR),并利用PCR技术分析基因工程疟原虫内Flp酶介导的FRT位点间的重组效率。通过检测感染小鼠的发病情况、疟疾血症及生存曲线分析基因工程疟原虫的生物学特性。结果成功构建打靶载体pyUIS4/Flp并重组至UIS4基因的5′调控区,获同源重组疟原虫P.yUIS4/Flp(R),经蚊体内发育获位点特异重组删除药物筛选基因的基因工程疟原虫P.yUIS4/Flp。PCR和核酸探针鉴定基因工程疟原虫基因型正确。基因工程疟原虫内Flp酶介导的FRT位点间的重组在发育至14d的子孢子内达到近100%的重组效率。与野生型疟原虫比较,小鼠感染后3 d镜下均查见感染红细胞,其内疟原虫形态未见异常,7 d红细胞寄生率达峰值,分别为80.5%和82.7%,疟疾血症及生存曲线均无统计学差异(P>0.05)。结论成功构建基因工程疟原虫P.yUIS4/Flp,其生物学特性与野生型疟原虫无明显不同,并具有较高的位点特异的重组效率,可用于疟原虫红前期基因功能的研究及减毒活疫苗的研制。 | 王姗姗 赵会丽 邓舒 梁佳元 王斯 刘昂 谭文彬 薛庆节 杜峰 | 2020 | 中国病原生物学杂志2020，15，6： | 0 |
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