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| 1 | 大口黑鲈虹彩病毒双重PCR检测方法的建立显示文摘为同时检测患病大口黑鲈中不同属虹彩病毒感染和带毒情况,针对蛙病毒属和肿大细胞病毒属大口黑鲈虹彩病毒主衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因的序列,分别设计1对特异性引物Rana-mcp F/R和Mega-mcp F/R,扩增产物片段大小分别为475 bp和262 bp。通过PCR反应体系的优化、反应的特异性和灵敏度试验,建立一种可以同时检测大口黑鲈蛙病毒属和肿大细胞病毒属虹彩病毒感染的双重PCR检测方法,最低DNA检测量分别为6.5 pg和14.5 pg。用此方法,对临床获得的15个大口黑鲈样品进行双重PCR检测和序列测定,获得5个蛙病毒属和1个肿大细胞病毒属虹彩病毒检测阳性结果。本研究中建立的基于MCP基因的大口黑鲈虹彩病毒双重PCR检测方法,可用于养殖大口黑鲈虹彩病毒病快速鉴别诊断和分子流行病学调查。 | 王庆 曾伟伟 刘春 马冬梅 石存斌 吴淑勤 | 2013 | 华中农业大学学报2013，32，4： | 11 |
| 2 | 大口黑鲈溃疡综合征病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立显示文摘根据大口黑鲈溃疡综合征病毒(Largemouth bass ulcerative syndrome virus,LBUSV)的甲基转移酶(MTase)基因核苷酸序列设计引物及TaqMan-MGB探针,优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,建立了LBUSV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法.用含有MTase基因的质粒pDNA-MT系列稀释作为标准品模板,在荧光定量PCR仪上进行PCR反应,绘制标准曲线,斜率为-3.24,R2=0.999,呈现很好的线性关系,扩增效率1.04.灵敏度检测结果表明,PCR反应24个循环时可以检测到的质粒最小浓度是102拷贝数/μL.选用107、106、105、104拷贝数/μL 4个浓度梯度质粒做模板,变异系数在1.1%-3.4%范围内,说明该方法具有良好的重复性和稳定性.利用该方法可以准确地检测出感染LBUSV的病鱼,特异性强. | 马冬梅 白俊杰 邓国成 李胜杰 张莉莉 | 2011 | 华南农业大学学报2011，32，2： | 8 |
| 3 | 大口黑鲈溃疡综合征病毒MCP基因的原核表达及重组蛋白的免疫效果初步分析显示文摘为了预防近年来流行于广东省养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)中的病毒性溃疡综合征,以大口黑鲈溃疡综合征病毒(Largemouth bass ulcerative syndrome virus,以下简称LBUSV)的主要衣壳蛋白(MCP)作为目标抗原蛋白,将MCP基因开放阅读框插入到pBV220载体中,转化大肠杆菌DH5α,构建重组表达MCP蛋白的工程菌。重组菌经过42℃温度诱导和SDSPAGE电泳,检测到在分子量51 k D处有一条特异表达蛋白带,重组蛋白约占重组菌体总蛋白的30%。重组MCP蛋白经洗涤、纯化、溶解、复性和透析后纯度达90%以上。将纯化后的重组蛋白与不完全弗氏佐剂混合、乳化后,免疫大口黑鲈,然后进行感染实验,感染后20 d疫苗保护率最高达67.7%。结果表明,该病毒MCP蛋白具有一定的免疫原性,可以作为制作重组疫苗的候选蛋白。 | 马冬梅 邓国成 白俊杰 江小燕 曹婷婷 蔡磊 | 2016 | 生物技术通报2016，32，8： | 6 |
| 4 | 一例乌苏里拟鲿体表溃疡症的病理学诊断 | 黄小丽 汪开毓 樊威 段亚佼 段靖 邓永强 杜宗君 耿毅 陈德芳 | 2016 | 南方水产科学2016，12，3： | 4 |
| 5 | 1株黑斑蛙源蛙病毒的分离鉴定及系统进化分析显示文摘【目的】为探究四川某养殖场黑斑蛙Rana nigromaculata蝌蚪爆发传染病病因。【方法】通过对患病蝌蚪进行病理学检查与病毒分离,并结合人工感染试验、电镜观察、PCR检测和系统发育分析对分离的病原进行鉴定。【结果】黑斑蛙患病蝌蚪主要临床特征为体表出血、腹部肿胀、腹腔内淡黄色腹水;组织病理学上,患病蝌蚪肝、肾、脾与胰腺等组织器官受损,出现明显的变性与坏死病灶,且在一些病变细胞胞浆内见嗜碱性包涵体。患病蝌蚪组织匀浆接种鲤鱼上皮瘤(EPC)细胞,25℃培养4 d后出现明显细胞病变效应(CPE),TCID50为108 mL–1。用病毒液进行人工感染试验,感病蝌蚪表现出与自然患病蝌蚪相似的症状,死亡率达到80%,证实分离病毒的病原性。电镜观察发现,病毒颗粒为正六边形,有囊膜,对角线直径(135±8) nm,在胞质中呈晶格状排列或游离状。针对蛙病毒MCP基因的PCR检测显示,自然患病蝌蚪、饲养水源以及分离病毒均为阳性,基于MCP全序列的遗传进化分析发现,分离病毒与蛙病毒属病毒的相似性在99%以上,且与蛙病毒属FV3病毒类群聚为同一分支。【结论】证实导致此次黑斑蛙蝌蚪大量死亡的病原为蛙病毒属病毒,将其命名为黑斑蛙蛙病毒(Rana nigromaculata ranavirus,RNRV)。 | 牟维豪 耿毅 欧阳萍 陈德芳 黄小丽 汪开毓 赵若璇 白明焕 | 2019 | 华南农业大学学报2019，40，2： | 3 |
| 6 | 大口黑鲈蛙虹彩病毒病研究进展显示文摘大口黑鲈(Micropterus salmoides),俗称加州鲈,是我国最重要名优养殖鱼类之一,具有极高的产业开发价值。近年来,大口黑鲈的养殖产业获得了飞速发展,而病害问题成为制约大口黑鲈产业持续健康发展的主要因素,其中以蛙虹彩病毒感染引起的病毒性疾病影响最大。本文就大口黑鲈蛙虹彩病毒病的研究历史、临床症状和病理变化、流行病学、感染机制、疾病诊断及防控措施等方面的研究进展进行综述,以期为该病的基础研究和疫病防控提供参考。 | 董寒旭 曾伟伟 | 2022 | 病毒学报2022，38，3： | 2 |
| 7 | 大口黑鲈虹彩病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用显示文摘为建立大口黑鲈虹彩病毒(LMBV)荧光定量PCR检测方法,本研究基于LMBV的主要衣壳蛋白(MCP)基因设计特异性引物及Taq Man探针,通过反应条件的优化,建立了LMBV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法以pMD-LMBV-MCP重组质粒为标准品,建立的标准曲线在4.6×10^(2)拷贝/μL~4.6×10^(8)拷贝/μL浓度范围内与Ct值具有良好的线性关系,相关系数(R2)为1,扩增效率(E)为99.2%。利用本实验建立的方法对传染性脾肾坏死病毒、大口黑鲈弹状病毒、神经坏死病毒、鲤春病毒血症病毒、草鱼呼肠弧病毒、传染性造血器官坏死病毒及LMBV进行检测,结果显示,该方法仅对LMBV产生特异性扩增,其他病原均为阴性,特异性强;该方法对重组质粒标准品的检测下限为46拷贝/μL,是常规PCR检测方法(4.6×10^(3)拷贝/μL)的100倍,敏感性高;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2.5%,重复性好。利用该方法对30份临床样品进行检测,结果显示LMBV阳性率为40%,显著高于常规PCR的13.3%;另外利用该方法对人工感染LMBV的大口黑鲈各组织进行病毒载量测定,结果显示其胃、肝、肠、脾和心脏的病毒载量高于其他组织。本研究建立的Taq Man荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于临床LMBV的检测和流行病学调查,为LMBV感染的早期诊断提供可靠的检测方法。 | 巩金鹏 潘晓艺 蔺凌云 姚嘉赟 黄雷 尹文林 刘忆瀚 沈锦玉 | 2022 | 中国预防兽医学报2022，44，5： | 0 |
| 8 | 2010年中国海洋微生物学研究成就显示文摘2010年中国学者对海洋微生物学的研究涵盖基础研究、应用研究以及基础研究与应用研究结合的产物,对方法学的探求越来越追求精准快速并向检测对象的多样性发展,对海洋病毒、海洋真菌、养殖生物病患、分类鉴定、生态和环境微生物学等方面的研究都有新的突破,发表的海洋微生物学论文约有350篇,其中水产学科的论文约有150篇,其余为基础性质的论文。学者们关注海洋微生物学的主要眼光正在从水产方面扩展,中国海洋微生物学研究正日臻成熟。 | 孙丕喜 郑风荣 陈皓文 | 2012 | 广西科学院学报2012，28，4： | 0 |
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