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| 1 | 不同植物组织RNA提取方法的比较分析显示文摘不同的植物组织都有较优化RNA提取方法。本文针对蜡质的红掌叶片、含糖较多的百合花瓣、含色素较多的万寿菊花瓣,使用改良CTAB法、Trizol法、快速RNA提取试剂盒法提取RNA,比较提取效果,以确定适合几种植物组织的最优RNA提取方法。结果表明:改良CTAB法提取的红掌叶片总RNA,Trizol法提取的百合花瓣总RNA和万寿菊总RNA,28SRNA和18SRNA条带都较清晰,且28SRNA亮度较18SRNA明亮,效果较好,部分RNA提取试验中5SRNA也较明亮,说明提取的总RNA有部分降解,但总RNA质量符合后续试验要求。RT-PCR检验符合上述结论。 | 王杰 王全 田娜 王瑜 王爱香 张克中 崔金腾 | 2015 | 北京农学院学报2015，30，1： | 27 |
| 2 | 三色堇花瓣总RNA3种提取方法的比较显示文摘分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测。结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高。3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260 nm/D280 nm在1.83~2.03之间。以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验。 | 李琴 王健 赵钟鑫 尚啸 | 2013 | 江苏农业科学2013，41，5： | 9 |
| 3 | 应用IC-RT-PCR方法检测水仙中百合斑驳病毒显示文摘水仙病毒严重影响水仙的品质与规模化生产,而快速检测水仙病毒可以有效防控其危害与扩散。根据已报道的百合斑驳病毒外壳蛋白基因序列设计PCR引物,利用免疫捕获PCR检测了水仙样品中百合斑驳病毒。PCR扩增产物回收后克隆到PMD19-T载体中测序。把克隆得到的百合斑驳病毒外壳蛋白基因部分序列提交到Genbank中。结果表明:基因登录号为JF714974,克隆的百合斑驳病毒外壳蛋白基因部分序列与国内外百合斑驳病毒同源性为90.4%~99.5%。建立了水仙中百合斑驳病毒的IC-RT-PCR的检测方法,简化了试验步骤,适合于水仙中百合斑驳病毒的快速检测。 | 贾丽霞 李志勇 马继芳 | 2011 | 北方园艺2011，，14： | 6 |
| 4 | 桃不同发育时期叶片总RNA提取方法的比较显示文摘为了从桃叶片中提取到高质量的RNA,以进行反转录、RT-PCR等后续分子生物学试验,选取了改良硼砂-CTAB法、改良CTAB法、改良SDS-苯酚法、试剂盒法、Trizol法,以及在试验中探索的改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ对桃不同发育时期的叶片总RNA进行提取,测定RNA样品的OD值,结合琼脂糖凝胶电泳检测总RNA样品的质量。结果表明,这些方法虽然都能获得桃叶片总RNA,但是或存在不同程度的DNA残留,或有蛋白、多糖等杂质污染,或降解严重;而改良的Trizol法提取总RNA的完整性和纯度较好;针对生长期和衰老期叶片的不同生理特性可分别采用改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ,提取的总RNA反转录后,通过RT-PCR检测,条带明亮清晰,与预期目的基因片段大小一致,说明这2种方法提取的总RNA能用于后期的分子生物学试验。 | 王其海 王裔娜 刘晓华 吴文江 丁宁 牛洪斌 王林忠 吴国良 | 2014 | 河南农业科学2014，43，3： | 6 |
| 5 | 火炬松总RNA提取方法的比较显示文摘植物总RNA提取的传统方法有很多种,如CTAB法,TRIzol法和SDS法。为了方便快捷的提取出高质量的植物总RNA,目前越来越多的植物总RNA提取的试剂盒被开发了出来,但不同的提取方法对不同植物组织的RNA提取效果不一。为了筛选出适合火炬松总RNA的提取方法,本研究以火炬松的韧皮部和较老的针叶为材料,比较了改良的CTAB法、Column Plant RNAout 2.0提取试剂盒、E.Z.N.A.TMPlant RNA Kit、Hi Pure Plant RNA Mini Kit、EASYspin Plus Plant RNA Kit和Mag Zol TM Reagent法提取总RNA的效果,结果表明:改良CTAB法对韧皮部和针叶均有最好的提取效果。Mag Zol TM Reagent法和EASYspin Plus Plant RNA Kit没能提取到完整的RNA,其他试剂盒的提取效果均不十分理想。 | 毛积鹏 祝文娟 王博 黄少伟 | 2016 | 分子植物育种2016，14，8： | 6 |
| 6 | 魔芋(Amorphophallus spp.)四种组织器官RNA提取方法的比较显示文摘由于魔芋植株各部位富含多糖,较难获得高质量的RNA。为了筛选出魔芋各组织器官总RNA提取最适合的方法,本研究采用Trizol法、异硫氰酸胍法、改良CTAB法、RNAprep Pure Plant Kit和Plant RNA Kit五种方法分别对花魔芋叶片、茎杆、根和球茎四种组织部位的总RNA进行了提取,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对RNA质量进行综合评价。结果表明:用Trizol法和异硫氰酸胍法提取魔芋各器官的RNA效果较差,杂质含量较高,降解严重;采用RNAprep Pure Plant Kit和Plant RNA Kit两种商业试剂盒仅提取出魔芋叶片的RNA,茎秆、根、球茎三种组织器官未能提取质量完整的RNA,所提取的RNA效果不稳定且浓度较低。改良CTAB法提取的魔芋四种组织器官RNA均能得到完整、清晰的RNA条带,且四个器官的OD260/OD280均在1.8~2.0之间,采用改良CTAB法提取魔芋各组织器官总RNA较为理想。本研究为不同器官来源魔芋植株样品的RNA提取方法提供了科学依据。 | 魏环宇 魏薇 杨敏 赵建荣 钟宇 刘佳妮 陈泽斌 裴卫华 陈海如 余磊 | 2019 | 分子植物育种2019，17，21： | 4 |
| 7 | 板栗子叶总RNA提取方法研究显示文摘为了获得板栗子叶总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以板栗幼果子叶为材料,采用改良CTAB法、硼砂-CTAB法、酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒共6种方法提取板栗子叶总RNA。结果表明,除硼砂-CTAB法外,其他5种方法均能获得板栗子叶总RNA。但是,与酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒相比较,改良CTAB法提取的板栗子叶总RNA完整性好,纯度高,且无DNA污染,能够满足cDNA-AFLP等分子生物学研究的要求。 | 王滨蔚 车鹏燕 何承忠 王猛 石卓功 | 2012 | 中国农学通报2012，28，22： | 4 |
| 8 | 滇杨叶芽总RNA提取方法比较研究显示文摘采用改良CTAB法、硼砂/CTAB法、酚/SDS法、皂土法和2种总RNA提取试剂盒共6种方法提取滇杨叶芽总RNA,并通过紫外分光光度计测定RNA样品的纯度,琼脂糖凝胶电泳和cDNA-AFLP检测总RNA样品的完整性和质量。结果表明,硼砂/CTAB法和皂土法不适合滇杨叶芽总RNA的提取。改良CTAB法、酚/SDS法和2种试剂盒均能得到清晰的28S和18S条带。其中,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA完整性最好,OD260/OD280值在1.8~2.0之间,OD260/OD230值>2.0,经过cDNA-AFLP扩增分析,获得了清晰的条带。结果证明,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA能够满足RT-PCR等分子生物学实验。 | 车鹏燕 王滨蔚 李里 吴海 吴英英 辛培尧 何承忠 | 2012 | 云南农业大学学报(自然科学版)2012，27，3： | 2 |
| 9 | 火炬松MVA和MEP途径及萜烯合成酶基因的表达分析显示文摘火炬松(Pinus taeda L.)是世界上重要的经济树种之一,其含有的松脂被广泛应用于各个行业。为了探索火炬松中萜类化合物相关酶基因的表达规律,本研究对火炬松甲羟戊酸(mevalonate,MVA)途径和甲基赤藓糖醇-4-磷酸(2-methyl-D-erythritol-4-phosphate,MEP)途径及萜烯合成酶基因的表达进行分析。结果表明本研究所选的候选基因均在火炬松松针组织中具有特异高表达,而在树皮组织中的表达水平很低。MVA途径中的AACT、HMGS、PMK和HMGR基因在火炬松嫩叶组织中的表达量均高于成熟叶组织,而MEP途径中的MCS、CMS、IDS、DXR和DXS基因相反,它们在成熟叶组织中的表达水平高于嫩叶组织,此外,GGPS基因在嫩叶组织中的表达水平高于成熟叶组织,而GPS基因在成熟叶组织中的表达水平高于嫩叶组织,FPS基因则在成熟叶和嫩叶组织中的相对表达水平无显著差异;挥发性萜类化合物合成酶基因(+)-α-pinene、(-)-α-pinene和Levopimaradiene在火炬松嫩叶组织中的表达水平高于成熟叶组织,而二萜和三萜类化合物合成酶基因Squalene、Humulene、Monoterpene和Farnesene则在成熟叶组织中表达水平更高。本研究为进一步揭示萜类化合物的生物合成调控机制提供了一定的理论基础。 | 曾韦珊 黄林旺 冯志恒 毛积鹏 刘天颐 黄少伟 | 2023 | 分子植物育种2023，21，4： | 1 |
| 10 | 细叶百合LpAGD14基因的克隆与表达分析显示文摘从细叶百合cDNA文库中克隆得到ArfGAP基因,该基因ORF序列编码640个氨基酸,具有一个典型的C4型ArfGAP保守结构域。蛋白相对分子量约为69.43kDa,理论等电点为8.95,为亲水性蛋白,没有跨膜结构。氨基酸序列与油棕的GTPase同源性达到59%,与芭蕉、海枣、石刁柏、凤梨的同源性都在50%以上,命名为LpAGD14。qRT-PCR分析LpAGD14表达量呈不断升高的趋势,其中休眠完全解除时基因表达量显著高于其他时期。亚细胞定位显示该基因定位在细胞膜上。超微结构观察发现随低温贮藏时间的延长高尔基体囊泡层数逐渐增多。这些结果表明LpAGD14可能通过影响囊泡运输参与细叶百合鳞茎休眠解除进程。该研究为深入了解该基因功能奠定了基础。 | 汪王 田忠平 苏小霞 杨柳慧 周蕴薇 | 2018 | 草业学报2018，27，2： | 1 |
| 11 | 细叶百合LpPEX5基因克隆及蛋白表达纯化显示文摘[目的]探究LpPEX5蛋白表达与纯化的最佳条件。[方法]从细叶百合的鳞茎中克隆出过氧化物酶体生物合成蛋白基因(LpPEX5),在详细分析该蛋白质同源氨基酸序列比对、进化树、保守区域,二级结构与三级结构预测等生物信息学后,构建到pQE-30原核表达载体上,转化大肠杆菌M15,通过SDS-PAGE凝胶电泳对不同诱导时间、诱导温度、IPTG浓度影响蛋白的表达量进行研究。利用亲核层析树脂纯化获得融合蛋白。[结果]成功克隆出LpPEX5基因,构建pQE-LpPEX5原核表达载体并且诱导和纯化出LpPEX5蛋白。[结论]LpPEX5蛋白的最佳诱导条件为30℃,1 mmol/L IPTG诱导5h。该研究为分析LpPEX5蛋白的活性、验证蛋白间的相互作用等后续试验研究奠定了基础。 | 徐阳 何好 朱国庆 陈诗雅 金淑梅 | 2020 | 生物技术2020，30，5： | 1 |
| 12 | 细叶百合LpPEX7基因克隆及盐胁迫下的表达特性分析显示文摘从细叶百合的鳞茎中克隆出过氧化物酶体生物合成蛋白基因(LpPEX7),该基因ORF全长957 bp,编码318个氨基酸。LpPEX7蛋白序列包含6个WD40保守结构域,通过同源蛋白序列比对和进化树分析,发现LpPEX7与其他植物的PEX7蛋白具有较高的同源性。LpPEX7基因在细叶百合种子,叶片和鳞茎中的表达量比较高,在根和花中表达量比较低,在H2O2,NaCl,NaHCO3不同逆境处理条件下,LpPEX7基因的表达量都发生了改变。在盐碱和氧化胁迫处理下,LpPEX7过表达拟南芥株系种子的萌发要早于野生型种子的萌发,这些研究结果表明LpPEX7基因与盐碱、氧化逆境有一定的应答关系,为细叶百合的耐盐碱性分子机理研究提供一个非常重要的候选基因。 | 何好 朱国庆 陈诗雅 徐畅 金淑梅 | 2020 | 植物研究2020，40，2： | 1 |
| 13 | 蒙古马血液中总RNA提取方法的比较和分析显示文摘为了筛选适宜于提取蒙古马血液总RNA的方法,试验采用TRIzol法和试剂盒法测定了新鲜血液和冻存血液在260,230,280 nm的吸光度及RNA纯度和浓度。结果表明:在新鲜和冻存血液中,用TRIzol法提取的RNA浓度明显高于试剂盒法,但用试剂盒提取的RNA纯度高于TRIzol法;新鲜血液中总RNA的提取量、浓度及纯度比冻存血液好。 | 乌英嘎 白东义 赵启楠 赵一萍 苏日嘎 芒来 | 2015 | 黑龙江畜牧兽医2015，，12： | 1 |
| 14 | 玛咖贮藏根总RNA提取方法的比较显示文摘为了筛选出适合玛咖贮藏根总RNA的提取方法,本研究比较了改良异硫氰酸胍法、CTAB法、Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法等4种方法对玛咖根总RNA提取的效果。结果表明:改良异硫氰酸胍法提取效果不理想,CTAB法存在DNA污染;Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法能有效去除多糖,提取出质量高、完整性好的RNA,OD260/OD280值大部分都在1.8~2.0之间,但Trizol法提取RNA的平均得率(156.3μg/g)是E.Z.N.A.TMPlant mi RNA Kit试剂盒法提取RNA的平均得率(48.6μg/g)的3.2倍,说明Trizol法可作为玛咖根总RNA提取的首选方法。 | 尚瑞广 李丽 孙涛 王兵益 | 2018 | 分子植物育种2018，16，6： | 1 |
| 15 | 百合AP2/ERF家族转录因子基因LoERF4的克隆和生物信息学分析显示文摘【目的】研究AP2/ERF家族成员ERF基因在百合休眠解除过程中的作用。【方法】以百合品种西伯利亚(Lilium oriental‘Siberia’)的小鳞茎为试验材料,从前期试验获得的转录组测序数据中筛选得到1个在小鳞茎休眠解除过程中显著上调表达的ERF转录因子,结合RT-PCR技术扩增得到西伯利亚小鳞茎的ERF基因cDNA全长序列,命名为LoERF4;通过多种生物信息学软件对LoERF4的基因结构和理化性质等进行分析;利用荧光定量qRT-PCR技术检测LoERF4基因在小鳞茎休眠解除过程中的相对表达量。【结果】通过克隆得到LoERF4基因全长,该基因开放阅读框全长为606 bp,编码201个氨基酸,含有1个典型的保守AP2结构域;蛋白相对分子量约为21.52 ku,理论等电点为6.43,为亲水性蛋白,没有跨膜结构。qRT-PCR分析结果显示:在西伯利亚小鳞茎休眠解除过程中,该基因的表达量在第20天小鳞茎休眠解除、开始萌发时极显著升高。【结论】在百合中克隆得到的LoERF基因可能是参与调控百合小鳞茎休眠解除进程的关键因子之一。 | 王浩 孙亮 张济民 贾文杰 吴雅文 张小平 李想 王有国 | 2022 | 云南农业大学学报(自然科学版)2022，37，6： | 1 |
| 16 | 百合ATP合成酶家族基因ATPase3的克隆和生物信息学分析显示文摘【目的】为有效解决百合花粉污染问题,利用分子生物学技术培育雄性不育的无花粉百合,从基因克隆和生物信息学角度研究百合ATP合成酶家族基因ATPase3在导致百合雄性不育过程中的作用,为应用该基因进行百合无花粉分子育种提供一定的理论基础。【方法】以百合可育系与不育系花粉母细胞时期花药为试验材料,在百合可育系与不育系转录组测序结果中筛选出1个花粉母细胞时期显著上调表达的ATPase3基因,利用荧光定量qRT-PCR技术检测ATPase3基因在百合可育系与不育系花粉母细胞时期不同部位的相对表达量。结合qRT-PCR与Race技术扩增得到百合花药ATPase3基因cDNA全长序列,并通过Prot Param、Prot Scale、NCBI Conserved Domain、SWISS-MODEL等在线生物信息学数据库对百合ATPase3同源性、蛋白结构、理化性质等进行生物信息学分析。【结果】百合ATPase3基因在花器官中表达量最高,其中在可育系花药中的表达量是不育系的7倍。通过克隆得到百合ATPase3基因,该基因全长327 bp,编码109个氨基酸,含有1个典型的保守ATPase3结构域;编码蛋白相对分子量约为12.14 KD,理论等电点为7.71,为疏水性蛋白,存在跨膜结构,并预测蛋白二级和三级结构。生物信息学分析说明该预测蛋白具有典型ATP合成酶特征。同源序列分析表明,该蛋白与拟南芥质膜ATPase3同源性最为接近,与拟南芥H[+]ATPase1,H[+]ATPase2,H[+]ATPase3,H[+]ATPase8同源性也较为接近。推测该蛋白属于百合中提供能量的质膜离子转运蛋白,它在百合不育系花药中表达量下调,提供能量不足,导致雄性不育。【结论】本研究验证了ATPase3基因与百合雄性不育相关,并成功克隆得到了ATPase3基因,对该基因进行了生物信息学分析和功能预测,为百合ATPase3基因编码的质膜离子转运蛋白功能缺失导致百合雄性不育现象的发生提供一定的理论基础。 | 贾文杰 马璐琳 段青 杜文文 王祥宁 李想 崔光芬 | 2023 | 西南农业学报2023，36，4： | 1 |
| 17 | 山丹百合花蕾总RNA提取方法的比较显示文摘以SDS改进法、CTAB改进法及EASYAPIN试剂盒法3种方法提取山丹百合花蕾的总RNA,并通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测对其提取效果进行分析比较。结果表明:SDS改进法提取的RNA效果不显著,CTAB改进法提取的RNA产量高,但有大量的DNA污染,需进一步纯化;EASYAPIN试剂盒法提取的RNA质量好,纯度高,完整性强,可直接进行下一步的分子生物学研究。 | 张鲜艳 亢秀萍 王峰 | 2013 | 北方园艺2013，，4： | 0 |
| 18 | 策勒黑羊卵巢总RNA的提取显示文摘策勒黑羊具有全年发情、多胎的特点,是新疆策勒县特有的优良绵羊品种。为研究与保护策勒黑羊遗传资源,为后续开展逆转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)、斑点杂交试验和构建c DNA文库试验等提供条件,试验采用经典异硫氰酸胍(Trizol)法提取策勒黑羊卵巢总RNA,通过核酸蛋白仪测定所提取RNA在不同波长下的吸光度值,计算RNA的提取量与纯度,并利用琼脂糖凝胶电泳显示提取结果和验证RNA的完整性。结果表明:采用Trizol法提取得到的策勒黑羊卵巢RNA的浓度、纯度与完整性均可达到后续试验的要求,可为后续策勒黑羊种质资源保护和利用等生物学试验的开展提供参考依据。 | 蒋维东 张晶 宋显明 艾东旭 李莲瑞 石长青 | 2017 | 黑龙江畜牧兽医(下半月)2017，0，4： | 0 |
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