| 1 | 抗氧化性丝素蛋白水解产物的生产工艺及其改善过氧化氢所致HepG2细胞损伤机制显示文摘目的:抗氧化性丝素蛋白(SF)胰酶水解工艺的优化。研究水解物对过氧化氢(H2O2)造成人肝癌Hep G2细胞损伤的改善作用,对其机制进行初步探讨。方法:以超氧自由基清除率为指标,设计正交试验考察丝素蛋白胰酶水解过程中反应时间、p H、温度、底物浓度、酶浓度对水解工艺的影响。测定水解产物的分子量分布及其对羟基自由基清除率和H2O2诱导的红细胞氧化溶血抑制率。用不同浓度H2O2处理细胞24 h,测定细胞活性,选择合适浓度的H2O2损伤细胞。然后再将细胞分为空白组(不加药物处理),H2O2损伤组,H2O2损伤+5 mmol·L-1N-乙酰半胱胺酸(NAC)治疗组,H2O2损伤+10,20,30,50 g·L-1SF治疗组。观察细胞活性,丙二醛(MDA)含量,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)的变化。结果:最佳水解工艺是酶浓度6%,反应时间160 min,底物质量浓度20 g·L-1,p H 8,温度38℃,此水解条件下所得水解液对超氧自由基清除率为72.73%,水解物分子量在10 k Da以下,对羟基自由基清除率和红细胞氧化溶血抑制率均提高。H2O2损伤细胞后细胞活性降低并且细胞中MDA含量增加(P<0.05)。与H2O2损伤组比较SF治疗组中细胞活性升高,MDA的含量也降低(P<0.05)。H2O2损伤细胞后,TNF-α含量上升,SOD,CAT的活性和T-AOC能力均下降(P<0.05),SF治疗能降低TNF-α含量,提高SOD,CAT分泌量和增强T-AOC能力(P<0.05)。结论:抗氧化性丝素蛋白水解物对过氧化氢致Hep G2细胞损伤有改善作用,机制是通过降低TNF-α含量,提高细胞活力和增加细胞中抗氧化酶活性。 | 朱震 王小娟 邓晗依 李春春 银华 安艳 | 2016 | 中国实验方剂学杂志2016，22，8： | 0 |
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