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| 1 | 稳定干扰NOR1基因对HeLa细胞的影响显示文摘目的:研究稳定干扰NOR1基因对宫颈癌HeLa细胞系的影响。方法:采用pSUPER.neo+GFP载体构建靶向NOR1基因的shRNA干扰载体pSUPER-shNOR1-1,pSUPER-shNOR1-2以及无关序列对照载体pSUPER-scramble,通过脂质体转染HeLa细胞,经G418筛选获得稳定干扰细胞系。采用RT-PCR和Western印迹检测NOR1 mRNA和蛋白表达水平。采用MTT法测定细胞生长曲线。采用H2O2处理HeLa细胞,采用Hoechst 33258染色和TUNEL法测定细胞凋亡。Western印迹检测干扰NOR1对HeLa细胞凋亡相关分子Bcl-2,caspase和聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)表达的影响。结果:稳定感染的shRNA干扰载体pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2抑制了HeLa细胞内源性NOR1的基因表达,成功构建了稳定干扰NOR1基因的HeLa细胞系。MTT生长曲线测定表明:与pSUPER-scramble质粒转染细胞相比,稳定转染pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2质粒促进了HeLa细胞的活力和增殖,并抑制了H2O2诱导的HeLa细胞凋亡。Western印迹检测发现稳定干扰NOR1抑制了H2O2诱导的HeLa细胞caspase 9和PARP的活化,上调了Bcl-2蛋白的表达。结论:稳定干扰NOR1基因促进了HeLa细胞的活力与生长,并抑制了H2O2诱导的细胞凋亡,其机制与干扰NOR1表达引起抗凋亡分子Bcl-2表达增加和抑制caspase 9活化有关。 | 谭怡忻 李文娟 易梅 王卫 郑盼 张海静 向波 李桂源 | 2014 | 中南大学学报(医学版)2014，39，8： | 3 |
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