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1devR基因调控的结核分枝杆菌细胞毒性的研究显示文摘目的阐明devR基因表达对分枝杆菌生长及感染能力的影响。方法确认野生型牛分支杆菌卡介苗(M.bovis BCG,简称BCG)、devR基因敲除的BCG菌株(简称ΔdevR)和devR基因回补的BCG菌株(简称devR.com)的devR序列正确;在不同时间点测定600 nm下的吸光度(A)值,绘制3种细菌的生长曲线;以感染复数(MOI)=10感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549(简称A549细胞)和小鼠巨噬细胞Raw264.7(简称Raw264.7细胞),分别采用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验于0、24、48、72 h测定细胞凋亡率和乳酸脱氢酶(LDH)释放水平;采用实时定量PCR(RT-PCR)测定凋亡相关基因bcl-2和bad的表达水平。结果ΔdevR菌株在早期(培养2-10 d)生长较BCG菌株和devR.com菌株明显加快(P〈0.01)。ΔdevR菌株感染A549细胞和Raw264.7细胞后,细胞的凋亡和坏死效应明显增加,与BCG菌株和devR.com菌株比较差异有统计学意义(P〈0.05)。3种菌株感染A549细胞均导致凋亡相关基因bcl-2表达上调,且ΔdevR菌株感染组bcl-2基因表达明显高于BCG和devR.com菌株感染组;3种菌株感染Raw264.7细胞均导致凋亡相关基因bad表达上调,且ΔdevR菌株感染组bad基因表达明显高于BCG和devR.com菌株感染组。结论 devR基因敲除的BCG菌株毒力明显增强。旦正尖措 马越云 周磊 付晓蕊 苏明权 郝晓柯 2015检验医学2015,30,6:0
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