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| 1 | AKT3基因重组腺病毒表达载体的构建及其对BT474乳腺导管癌细胞增殖的影响显示文摘目的构建人AKT3基因的重组腺病毒表达载体,探究其对人乳腺导管癌细胞增殖的影响。方法应用RT-PCR方法从流产胎儿脑组织总RNA中扩增出AKT3eDNA,以XhoI及最g21I酶切位点克隆入腺病毒pShuttle-IRES-hrGFP-1穿梭载体,测序鉴定后与骨架载体PAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,获得重组腺病毒表达载体pAd.AKT3后,转染293A细胞,进行病毒的包装。荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光,测定病毒效价,Western印迹方法分析细胞内AKT3蛋白质的表达。通过MTr实验,研究AKT3过表达前后BT474乳腺导管癌细胞增殖的变化。结果重组载体经酶切鉴定和测序证实目的基因正确无误。重组腺病毒效价为2.6×10^8pfu/ml,重组腺病毒转导后,BT474乳腺导管癌细胞中可检测到AKT3的过表达:Western印迹检测结果显示AKT3融合蛋白在BT474细胞中表达良好。而转导空载体腺病毒及未转导细胞对照中未见有此融合蛋白质条带;MTr结果显示AKT3表达上调的重组腺病毒组,其增殖活性显著高于转导空载体腺病毒组及未转导细胞组,差异具有统计学意义(P〈0.01),而后两者差异无统计学意义(P〉0.05)。结论成功地构建了AKT3重组腺病毒表达载体,AKT3过表达可增强BT474乳腺导管癌的增殖,为进一步研究AKT3的功能奠定了基础。 | 韩俊永 林炎鸿 黄俏佳 | 2014 | 医学分子生物学杂志2014，11，1： | 0 |
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