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1中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞自噬对凋亡影响的初步研究显示文摘目的探讨不同剂量中波紫外线(UVB)照射人皮肤成纤维细胞诱导的自噬对细胞凋亡活性的影响。方法人皮肤成纤维细胞来自于23岁健康男性环切术后包皮的原代培养,连续传代培养后取第3~10代的细胞进行实验。通过单丹酰戊二胺(MDC)染色和免疫荧光标记微管相关蛋白1轻链3(LC3)的方法,确定不同剂量3-甲基腺嘌呤(3-MA)对自噬的抑制作用。UVB照射后立即加入0.5mmol/L3-MA孵育细胞4h作为自噬的抑制方法。Hoechst和碘化丙啶(PI)染色结合AnnexinV-异硫氰酸荧光素(FITC)和PI标记细胞后流式细胞仪检测作为细胞凋亡的定性和定量方法。结果0.5mmol/L3-MA能明显抑制人皮肤成纤维细胞自噬活性(饥饿诱导组自噬细胞阳性百分数为63.037%±5.876%,3-MA孵育后下降至34.425%±5.183%)。空白对照组、30、50、100mJ/cm。UVB照射组标记LC3绿色荧光信号逐渐增强,照射后立即对上述4组加入3-MA孵育4h则LC3蛋白表达差异不明显。0.5mmol/L3-MA对细胞活性影响最小。50mJ/cmzUVB照射下加入3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞增多;100mJ/cm2UVB照射后加3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞减少。AnnexinV—FITC和PI标记细胞后流式细胞仪分析显示,在50mJ/cmzUVB照射下,抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[(10.933±0.839)%]较未抑制细胞[(7.267±0.473)%]上升,两者之间差异具有统计学意义(t=5.20,P〈0.05);而在100mJ/cmzUVB照射下,抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[(7.100±0.781)%]较未抑制细胞[(10.133±0.681)%]下降,两者之间差异具有统计学意义(t=6.29,P〈0.05)。结论50mJ/cm。UVB照射诱导人皮肤成纤维细胞自噬通过抑制凋亡对细胞起到保护作用,而在100mJ/cm。UVB照射下发生的较高水平自噬可能诱导了自噬.I生细胞死亡。陈旭 张青松 鞠梅 任发亮 黄丹 齐蓓 陈崑 常宝珠 李新宇 顾恒 2012中华皮肤科杂志2012,45,7:11
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