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| 1 | Lumican基因真核表达载体的构建及其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖的影响显示文摘目的:克隆人Lumican基因及构建Lumican基因真核表达载体并研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖的影响。方法:取人新鲜正常子宫内膜组织,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Lumican基因,将该基因定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建真核细胞表达载体pEGFP-N1-Lumican,用限制性内切酶酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒;将测序正确的Lumican基因通过脂质体介导下转染人子宫内膜癌细胞HEC-1A;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot检测转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA和蛋白表达。采用MTT法观察转染Lumican基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力。结果:重组质粒pEGFP-N1-Lumican经HindⅢ和BamHⅠ酶切,获得8 311 bp片段和865 bp插入片段,序列分析表明插入的片段与Gene Bank发布的序列一致;荧光显微镜下可见转染的HEC-1A细胞有绿色荧光蛋白的表达;转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA表达上调,Lumican蛋白相对上调率为74.62%(P<0.05)。与对照组细胞比较,转染Lumican基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的抑制率为21.35%±2.78%。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Lumican,该载体在体外能有效抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力,为以Lumican基因为靶点研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A的恶性生物学特性提供实验基础。 | 张慧峰 李岽健 杨镇 熊世禄 | 2013 | 荆楚理工学院学报2013，28，2： | 1 |
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