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1一种红色荧光蛋白基因稳定转化的家蚕细胞株构建及应用显示文摘构建一种红色荧光蛋白基因稳定转化的家蚕细胞株,用于检测细胞是否被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染和快速、便捷地测定BmNPV滴度。首先构建BmNPV多角体蛋白基因(polh)启动子驱动的红色荧光蛋白基因(DsRed)表达盒,然后将该表达盒克隆至pIZT/V5-His中构建稳定转化载体pIZT-DsRed并转染家蚕卵巢上皮细胞BmN,经过终浓度为300μg/mL的博莱霉素(zeocin)筛选3个月后,最终获得DsRed稳定转化的家蚕细胞株BmN-RFP。当该细胞株感染BmNPV后,由于病毒晚期表达因子的活化引发polh启动子控制的DsRed表达,在荧光显微镜下可以观察到感染病毒的细胞发出红色荧光,因而BmN-RFP可用来指示BmNPV的感染。利用BmN-RFP细胞株,采用终点稀释法仅用3 d时间即可完成BmNPV滴度的测定。陈和 陈琴 梅文枫 钱月忠 聂作明 于威 陈健 张耀洲 2013蚕业科学2013,39,3:0
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