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| 1 | 人胆固醇酯转运蛋白的cDNA克隆、原核表达及抗血清制备显示文摘目的:克隆人胆固醇酯转运蛋白(CETP)cDNA序列,利用大肠杆菌表达人CETP,制备兔抗人CETP的多克隆抗血清。方法:采用RT-PCR方法,将人CETP基因克隆到pET-30b(+)上,构建CETP原核表达载体并转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备CETP抗血清,以ELISA、Western blot、细胞免疫荧光方法对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果:SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CETP基因在大肠杆菌BL21(DE3)的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为4h。将切胶纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶5.12×105。Western blot及细胞免疫荧光检测结果显示,抗血清可以与CETP原核及真核表达蛋白特异结合。结论:成功地将CETP进行了原核表达并制备了高效价、高特异性的兔抗人CETP抗血清,为进一步研究CETP的结构与功能奠定了基础。 | 刘惠荣 曾武威 周冰 申乐 吴刚 薛红 陈保生 | 2008 | 细胞与分子免疫学杂志2008，24，5： | 1 |
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