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1德国小蠊变应原Bla g2的克隆、表达及其免疫学特性鉴定显示文摘目的获得大量具有良好IgE结合活性的Bla g2重组变应原,以用于变态反应性疾病特异性诊断及免疫治疗的研究。方法提取德国小蠊总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Bla g2片段,产物连接进入pMD18-T载体。挑取重组子,用NdeⅠ和NotⅡ双酶切后将目的片段亚克隆入pET24a(+),经IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,并采用Western-blot检测其免疫学结合活性。结果扩增出编码328个氨基酸的长度为984个碱基对的核苷酸片段,序列分析结果和GenBank上的基因序列(U28863)完全一致。重组变应原在E.coliBL21 star中得到高效表达,具有良好的反应原性。结论成功构建了德国小蠊变应原Bla g2的原核表达载体,并纯化出具有免疫原特性的重组蛋白,为进一步开展Bla g2蛋白和重组疫苗研究奠定了基础。刘志刚 何毅华 高波 2007中国人兽共患病学报2007,23,3:2
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