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1黄蜀葵查尔酮合成酶基因AmCHS克隆及序列分析显示文摘从黄蜀葵(Abelmoschus manihot)花瓣中通过简并引物克隆得到查尔酮合成酶基因cDNA核心序列,根据核心序列设计特异引物,再应用5′RACE和3′RACE技术分别扩增该序列的5′末端和3′末端序列,最后通过序列拼接获得黄蜀葵查尔酮合成酶基因(AmCHS)cDNA全序列.序列分析结果表明AmCHS cDNA编码区长1170 bp,编码389个氨基酸.其氨基酸序列与其它已知高等植物CHS基因具有很高的同源性,并且包含了CHS具有的活性位点和催化位点等保守性位点.林颖 郭秀莲 朱勋路 林莎 白洁 陈放 2008四川大学学报(自然科学版)2008,45,6:8
2不依赖基因序列和连接反应克隆(SLIC)方法的改进显示文摘SLIC(Sequence and Ligation Independent Cloning)是一种不依赖于基因序列和连接反应的高效基因克隆新方法.为了进一步提高该方法的重组效率,将T4连接酶缓冲液改换成退火缓冲液,并使用相应的退火程序,可使重组效率提高至少10倍.此外,参加重组的若干DNA片段在同一反应体系中用T4 DNA聚合酶处理,再使用相同的方法退火,其重组效率仍然可以提高至少10倍.因此,利用本研究所建立的SLIC改进方法,不仅可以提高重组效率,而且还可以用于多DNA片段的高效重组,减少研究者的时间和节约实验成本.王广珺 何川 张义正 2010四川大学学报(自然科学版)2010,47,4:6
3乳酸杆菌中单宁酶基因的克隆、表达与纯化显示文摘利用基因工程的方法从乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum ATCC14917T)中克隆单宁酶基因,构建重组表达载体pNIC28-Bsa4-tanLpl,转化大肠杆菌(BL21-DE3)进行表达,并对单宁酶进行了纯化及简单的性质测定.亲和层析纯化后单宁酶产量大约为80 mg/L菌液,SDS-PAGE分析在50 kD处有单一的目的条带,用五倍子酸甲酯作为酶的底物对单宁酶性质的研究显示该酶在温度为30℃,pH为8的条件下活性最高(390 U/mg).吴明波 彭晓红 温华 任斌 2012四川大学学报(自然科学版)2012,49,2:2
4辛伐他汀治疗高胆固醇血症小鼠过程中肝脏的差异表达基因显示文摘为了研究辛伐他汀治疗高胆固醇血症过程中肝脏的差异表达基因,我们利用抑制消减杂交(SSH)技术构建了高胆固醇血症小鼠及高胆固醇血症经辛伐他汀治疗小鼠的肝脏双向差异表达基因文库,并采用改进的negative subtraction chain(NSC)方法去除正向文库的绝大部分假阳性背景,使得SSH文库的容量缩小了近50倍,对筛选到14个差异表达克隆再经过斑点杂交验证,最终获得8个阳性克隆.经DNA序列测定和基因功能分析,结果表明,辛伐他汀治疗高胆固醇血症过程中,小鼠肝脏差异表达的已知功能基因主要有以下几类:脂类代谢基因、炎性免疫反应相关基因、细胞粘附基因、逆境胁迫基因.改进的NSC和SSH技术的结合使用,大大地增加了差异表达基因文库的阳性率,提高了获得差异表达基因的效率.闫雯琦 李珉 李星洁 康耀霞 康晋梅 张义正 2010四川大学学报(自然科学版)2010,47,5:0
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