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| 1 | 连翘乙醇提取物对小鼠抵御伤寒沙门菌感染能力的研究显示文摘目的:观察连翘乙醇提取物对小鼠抵抗鼠伤寒杆菌能力的影响。方法:将不同剂量连翘乙醇提取物腹腔连续注射感染鼠伤寒的小鼠6d,对照组小鼠注射0.9%氯化钠注射液,观察小鼠的生存时间,脾脏的重量指数,脏器菌落计数,检测小鼠血清中抗体IgG水平,用ELISA法测定小鼠脾脏释放的细胞因子。结果:经连翘乙醇提取物治疗的小鼠,与对照组相比,生存时间均延长,脾脏重量指数均降低,脾脏菌落计数均降低,血清中抗体IgG水平均升高,脾脏细胞分泌细胞因子IFN-γ水平平均上升。连翘乙醇提取物治疗剂量30g·kg^(-1)·d^(-1)时可使感染鼠的存活率达70%以上(P<0.05)。结论:连翘乙醇提取物能够通过增强抗体的产生,调节细胞因子的释放,增强宿主的体液免疫和细胞免疫功能保护宿主抵抗胞内菌的感染。 | 程晓莉 肖琴 刘明星 颜学滔 杨务彬 | 2009 | 中国药师2009，12，4： | 11 |
| 2 | 减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展显示文摘活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体。现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功。文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述。 | 杨冬梅 王鹏雁 王远志 陈创夫 | 2007 | 动物医学进展2007，28，4： | 4 |
| 3 | 重组减毒细菌运送CD8^+T细胞表位的效应分析显示文摘目的:分析重组减毒菌体外运送CD8+T细胞表位的效应。方法:以表达卵清蛋白(OVA)和淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)CD8+T细胞表位的重组菌13A(ptG2F)、25A(ptG2F)和SL7207(ptG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb、LLd和骨髓源树突状细胞(BMDC),应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+T细胞表位的提呈效应。结果:感染试验证实,减毒菌13A、25A和SL7207对LKb细胞或LLd细胞均具有良好的侵袭能力,BMDC对重组菌具有很好的摄取功能。抗原提呈试验结果显示,在感染的早期(2h),LKb、LLd细胞和BMDC均可提呈重组菌13A(ptG2F)或SL7207(ptG2F)运送的T细胞表位;在感染的晚期(48h),LKb细胞对OVA257-264CD8+T细胞表位的提呈效应降低,LLd细胞对LCMV118-132CD8+T细胞表位的提呈效应增强。3种APC均不能提呈25A(ptG2F)运送的T细胞表位。另外,在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb和LLd细胞。结论:重组菌能运送CD8+T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。 | 潘志明 张晓明 焦新安 Richard Lo-Man Claude Leclerc 刘秀梵 | 2006 | 细胞与分子免疫学杂志2006，22，6： | 4 |
| 4 | 口服重组沙门菌诱导的免疫应答动态分析显示文摘以融合表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)和OVA、LCMV NP CD8^+T细胞表位的重组减毒沙门菌SL7207(ptG2F)为免疫原,经口服途径接种BALB/c小鼠,每2周加强免疫1次,分别于第2次、第3次、第4次、第5次免疫后,以ELISPOT法分别测定免疫小鼠派伊尔氏结细胞中特异性针对OVA和LCMV NP CD8^+T细胞表位的IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞。同时,运用ELISA分别检测血清、肠黏膜中的GFP特异性抗体,分析了口服重组减毒沙门菌诱导的特异性免疫应答动态规律。实验表明SL7207(ptG2F)口服免疫BALB/c小鼠后,诱导产生了LCMV NP CD8^+T细胞表位(H-2~d)特异的细胞免疫应答。在第2次免疫后,即可检测到特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞;在第3次免疫后,IFN-γ分泌细胞数量明显高于IL-4分泌细胞数。然而,在第4、5次免疫后,IFN-γ分泌细胞数和IL-4分泌细胞数相当,未见明显变化。试验中未能检测到针对OVA CD8^+T细胞表位(H-2~b)的细胞免疫应答。运用ELISA方法检测到SL7207(ptG2F)、SL7207(ptGFP)免疫组GFP特异性IgG和IgA抗体,与对照组相比较,差异显著(P<0.05)。结果表明重组减毒沙门菌口服免疫可以有效运送外源抗原至宿主免疫系统,并诱导产生特异性细胞免疫应答和黏膜免疫应答。 | 张辉 焦新安 潘志明 胡茂志 唐丽华 | 2007 | 中国预防兽医学报2007，29，5： | 3 |
| 5 | 沙门氏菌感染T细胞激活的研究显示文摘 | 李妤蓉 马涛 赵金媛 李朝争 | 2007 | 社区医学杂志2007，5，05S： | 3 |
| 6 | 沙门菌鞭毛蛋白增强新城疫病毒融合蛋白在小鼠中的免疫原性显示文摘目的:分析沙门菌鞭毛蛋白对新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F蛋白)免疫原性的增强作用。方法:提取鼠伤寒沙门菌SL7207株鞭毛蛋白,将鞭毛蛋白与F蛋白以皮下注射的方式联合免疫C3H/HeJ小鼠,间隔2周免疫,共免疫3次。分别在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血清,应用ELISA法测定小鼠血清抗体;在第3次免疫后2周取免疫小鼠脾脏细胞,检测IFN-γ和IL-4特异性分泌细胞。结果:鞭毛蛋白与F蛋白联合免疫能诱导产生特异性的免疫应答,血清抗体水平显著高于F蛋白单独免疫组;在脾脏细胞中,检测到较高水平的IFN-γ和IL-4分泌细胞,免疫应答以Th1型为主。结论:鞭毛蛋白与F蛋白的联合免疫,可显著增强F蛋白的免疫原性,显示出鞭毛蛋白良好的免疫佐剂效应。 | 潘志明 文科 游猛 耿士忠 方强 焦新安 | 2009 | 生物技术通讯2009，20，6： | 3 |
| 7 | 展呈H5N1亚型禽流感病毒M2e表位鞭毛蛋白的构建及其免疫原性显示文摘以重组质粒pET-fliC和pUC57-M2e2为模板,通过重叠PCR将M2e2基因插入fliC的高变区域,构建嵌合鞭毛基因片段fliC/M2e2。将fliC/M2e2片段插入原核表达载体pET30a+,获得重组质粒pET-fliC/M2e2,将其转化鼠伤寒沙门氏菌LB5000,获得重组菌LB5000(fliC/M2e2)。应用P22噬菌体转导技术,将fliC/M2e2基因导入都柏林沙门氏菌SL5928的基因组中,经生化血清学鉴定、动力学测定、透射电镜观察、Western-blot分析,将阳性转导菌命名为SL5928(fliC/M2e2)。提取重组菌鞭毛蛋白fliC/M2e2作用HEK293-mTLR5细胞,能刺激细胞分泌IL-8。将fliC/M2e2通过皮下注射途径免疫C3H/HeJ小鼠,50μg/只。结果显示,二免后第14天,fliC/M2e2鞭毛蛋白免疫组的血清抗体效价与对照组之间呈现显著性差异(P<0.05)。ELISPOT结果表明,在脾细胞中,fliC/M2e2鞭毛蛋白免疫组检测到较高水平的IFN-γ和IL-4分泌细胞,且免疫应答以Th1型为主。结果表明,构建的fliC/M2e2嵌合基因能够在沙门氏菌中表达,重组嵌合鞭毛蛋白fliC/M2e2能激发机体针对M2e表位的体液免疫应答和Th1型细胞免疫应答。 | 游猛 潘志明 方强 耿士忠 康喜龙 杨芸 焦新安 | 2012 | 中国兽医科学2012，42，2： | 3 |
| 8 | 减毒鼠伤寒沙门菌体内定位分析显示文摘分析减毒鼠伤寒沙门菌口服感染后在小鼠体内定位的情况。将构建的红色荧光蛋白(RFP)原核质粒pYA33-DsRed,以电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门菌X4550,重组菌命名为X4550(33-DsRed)。重组菌分别感染巨噬细胞RAW264.7和骨髓源树突状细胞(BMDC),并用流式细胞术检测红色荧光细胞荧光强度。此外,以不同剂量重组菌口服免疫BALB/c小鼠,并于免疫后1d、2d、3d、5d、7d取小鼠脾、肝、肠系膜淋巴结(MLN)、派伊尔氏结(PP)、腹股沟淋巴结(ILN)细胞,检测各组织器官中的红色荧光阳性细胞百分率。重组菌对RAW264.7细胞和BMDC均具有良好的侵袭力。口服小鼠后,第1d,仅在MLN及PP中检测到RFP阳性细胞,其中PP中阳性细胞达到1.4%;第2d,在ILN中达到0.4%;第3d,各个组织器官中RFP阳性细胞均有上升趋势,此时在脾、肝中也检测到RFP阳性细胞。第5d,RFP阳性细胞均减少,第7d则未检测到任何RFP阳性细胞。减毒鼠伤寒沙门菌具有良好的侵袭力,其黏膜移行方式以及对免疫组织器官靶向定位性,在优化黏膜疫苗以及提高疫苗免疫效力等方面都具有重要作用。 | 张辉 胡茂志 顾志强 焦新安 耿士忠 张晓明 潘志明 | 2008 | 微生物学报2008，48，1： | 3 |
| 9 | 细粒棘球蚴重组St-Eg 95-Eg.ferritin疫苗构建及生物学特性检测显示文摘构建表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的重组口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株并评价其生物学特性。将细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合基因插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,将重组质粒分别电转入减毒鼠伤寒沙门菌X3770和X4550,获得重组疫苗菌株St-Eg95-Eg.ferritin,对重组菌的稳定性、生长状态及安全性进行分析。结果表明,经PCR和酶切鉴定成功构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,Western blot检测Eg95-Eg.ferritin蛋白在重组菌中获得表达;生物学特性研究结果表明,重组质粒可稳定存在,且不影响重组菌的生长状态,小鼠口服试验证实,重组菌安全无毒性。成功构建能稳定表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株,将为研究包虫病口服基因工程疫苗奠定基础。 | 王志昇 林源 刘强 吴璟 郎多勇 李红兵 杨文 | 2014 | 西北农业学报2014，23，10： | 3 |
| 10 | 结核分枝杆菌CFP32蛋白的原核表达及其细胞免疫学检测价值评价显示文摘目的克隆、表达与纯化结核分枝杆菌CFP32蛋白,并对其进行细胞免疫学特性评价。方法 PCR扩增cfp32基因片段,与pET-30a(+)构建重组表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,对融合蛋白进行纯化,ELISPOT试验测定其细胞免疫应答,通过牛结核外周血IFN-γ释放试验,评价其作为刺激原的能力。结果构建了正确基因序列的重组质粒,并在BL21(DE3)中高效可溶性表达,融合蛋白大小为32ku,纯度达91.8%。ELISPOT显示CFP32蛋白刺激机体分泌IFN-γ和IL-4的细胞数相当,呈现Th1/Th2的平衡。在牛结核外周血IFN-γ释放试验中,其阳性符合率和阴性符合率分别为40%和73.3%,与牛型PPD刺激结果的相关系数为0.684。结论成功构建CFP32蛋白重组表达菌,该蛋白引起的免疫应答趋向于Th1/Th2的平衡,并且有作为刺激原用于牛结核病检测的潜力。 | 万婷 孟闯 陈祥 万李 文志发 徐正中 单法 殷月兰 焦新安 | 2014 | 中国人兽共患病学报2014，30，6： | 2 |
| 11 | 重组沙门菌表达结核分枝杆菌ESAT-6及其特异性免疫应答分析显示文摘目的分析重组沙门菌表达的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌性蛋白ESAT-6诱导的特异性免疫应答。方法将ESAT-6蛋白编码基因导入原核表达载体pYA3333中,构建重组质粒pYA33-esat。通过电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门菌X4550,获得重组菌X4550(33-esat)。以每只10。CFU剂量的重组菌滴鼻免疫C57BL/6小鼠,间隔18d,在第2次免疫后10d取免疫小鼠脾脏、肺脏、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node,MLN)及派伊尔淋巴集结(Peyer‘s patch,PP)细胞,以ESAT-6多肽作为刺激原,检测特异性的IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞。同时,运用CFSE方法检测了体内抗原特异性CTL效应。结果经沙门菌表达并运送的Mtb抗原ESAT-6能诱导特异性的免疫应答。在肺脏及PP细胞中,检测到较高水平的IFN一1和IL_4分泌细胞,免疫应答以Th1型为主。而在脾脏和MLN中,免疫应答呈现Th1/Th2混合应答。此外,体内CTL试验表明,重组菌能够诱导抗原特异的CTL效应,且特异性杀伤率为69.9%。结论以滴鼻方式接种重组沙门菌,不仅能够诱导ESAT-6蛋白特异性的细胞免疫应答,还能激发特异的CTL效应,为结核病的防控提供了新的认识。 | 张辉 刘柳 耿士忠 胡茂志 文科 潘志明 焦新安 | 2009 | 中华微生物学和免疫学杂志2009，29，6： | 1 |
| 12 | L-ficolin保护小鼠抵御伤寒杆菌感染作用的研究显示文摘目的探讨L-fcolin在小鼠体内抵御鼠伤寒杆菌(Salmonellatyphiurium)感染的作用。方法以构建的pcDNA3-L-ficolin、pcDNA3及生理盐水分别作为实验组、阴性对照组及空白对照组,用活体基因导入仪分别肌肉内注射于感染鼠伤寒杆菌C5的BALB/c小鼠,观察小鼠的生存时间,检测肝脾中的活菌数、肝脾脏器重量指数(WI)以及脾脏中IFN-γ和IL-4的水平。结果于注射后第7天,检测3组小鼠的各项指标。实验组小鼠的半数死亡时间明显长于两个对照组。实验组肝、脾组织中的活菌数,分别为(5.12±0.21)logCFU/(mL·g)及(3.29±0.83)logCFU/(mL·g);阴性对照组分别为(7.49±1.27)logCFU/(mL·g)及(6.46±0.56)logCFU/(mL·g);空白对照组分别为(7.52±1.12)logCFU/(mL·g)及(6.44±0.27)logCFU/(mL·g);实验组明显低于两个对照组(P<0.05)。实验组小鼠的脾WI为0.376±0.16,明显低于阴性对照组(为0.84±0.12)及空白对照组(为1.01±0.05,P<0.05)。实验组脾组织匀浆中IFN-γ的水平为(1287.87±194.96)ng/L,明显高于阴性对照组[为(464.19±68.72)ng/L],空白对照组[为(361.17±201.27)ng/L],(P<0.05);但3组小鼠脾脏组织匀浆中Th2型细胞因子IL-4的水平没有区别。结论pcDNA3-L-ficolin对小鼠抵御伤寒杆菌的感染有一定的保护作用,其作用机制可能是通过提高TH1型细胞因子IFN-γ的水平而抑制细菌的生长。 | 向田 马运峰 章晓联 | 2007 | 细胞与分子免疫学杂志2007，23，2： | 1 |
| 13 | 嵌合鞭毛蛋白fliC/esat佐剂效应的研究显示文摘目的:研究嵌合形式表达的鞭毛蛋白对结核分枝杆菌(MTB)抗原ESAT-6的免疫佐剂效应。方法:用PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白基因fliCi及MTB抗原ESAT-6编码序列,通过重叠PCR将ESAT-6编码序列插入fliCi的高变区域,构建嵌合鞭毛基因片段fliC/esa。t将fliC/esat片段分别插入原核表达载体pET,构建pET-fliC/esat质粒。将ESAT-6编码序列插入原核表达载体pBCX的多克隆位点,构建原核表达质粒pBCX-esat。以质粒pET-fliC/esat及pBCX-esat分别转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基1-1硫代-β呋喃半乳糖苷诱导融合的嵌合蛋白fliC/esat及ESAT-6蛋白的表达。以抗ESAT-6 mAb HYB 076-08为一抗,通过W estern b lot鉴定嵌合蛋白fliC/esat及ESAT-6蛋白。以两种蛋白分别在体外刺激骨髓树突状细胞(BMDCs),通过FACS分析共刺激分子CD40、CD80、CD86和CD54的表达,同时用ELISA检测前炎性因子IL-12p70表达的水平。此外,以两种蛋白分别免疫C57BL/6小鼠,运用ELISPOT法分析ESAT-6特异的IFNγ-及IL-4分泌细胞的产生。结果:嵌合蛋白及ESAT-6蛋白均可溶性表达,相对分子质量(Mr)约为64000和39000。Western blot的结果显示,fliC/esat嵌合蛋白及ESAT-6蛋白均具有良好的反应原性。与ESAT-6蛋白相比较,fliC/esat嵌合蛋白在体外能诱导BMDCs成熟。IL-12p70的检测结果显示,fliC/es-at嵌合蛋白诱导BMDCs分泌的IL-12p70明显高于ESAT-6蛋白诱导分泌的IL-12p70(P<0.01)。体内实验结果表明,嵌合鞭毛蛋白免疫组能够显著增强ESAT-6特异性免疫应答,且免疫应答趋于Th1型。结论:鞭毛嵌合表达ESAT-6抗原,能够有效地上调BMDCs共刺激分子表达,增强ESAT-6特异性细胞的免疫应答,以嵌合形式表达的鞭毛蛋白对ESAT-6抗原具有诱导Th1型免疫应答的佐剂效应。 | 张辉 文科 黄金林 胡茂志 申峻松 潘志明 焦新安 | 2011 | 细胞与分子免疫学杂志2011，27，4： | 1 |
| 14 | 禽用减毒沙门菌活载体疫苗的研究进展显示文摘疫苗主要通过激发机体的免疫系统来达到防治疾病的目的。目前,疫苗主要有灭活疫苗、减毒疫苗及基因工程疫苗等。基因工程疫苗包括基因缺失苗、基因重组苗等。活载体疫苗是将胞内感染性的细菌直接用来运载目的基因进入体内,而产生相应的免疫应答反应。目前沙门菌的预防与治疗通常使用药物,但沙门疫苗研究正迅速发展,如减毒沙门菌活载体疫苗则是将减毒后的沙门菌作为载体, | 朱麟 王红宁 | 2008 | 中国家禽2008，30，21： | 0 |
| 15 | 重组减毒大肠杆菌对真核表达的CD8^+T细胞表位的运送研究显示文摘目的:分析体外、体内重组减毒大肠杆菌运送真核表达的CD8+ T细胞表位的效应。方法:将携带融合表达绿色荧光蛋白(GFP)与OVA CD8+ T细胞表位基因真核表达质粒的重组大肠杆菌13A(pG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb和骨髓源树突状细胞(BMDC),应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+ T细胞表位的提呈效应。同时,重组菌13A(pG2F)以静脉注射方式免疫C57BL/6小鼠,应用ELISPOT法检测特异性IFN-γ分泌细胞。结果:感染试验表明,大肠杆菌13A能向APC中运送真核表达质粒,并且外源GFP基因获得了表达。体外抗原提呈试验结果显示,在感染的早期(2小时),LKb和BMDC均可提呈重组菌13A(pG2F)运送的T细胞表位;在感染的晚期(48小时),LKb细胞对CD8+ T细胞表位的提呈效应增强。在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb细胞。体内结果显示,大肠杆菌可以有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位并诱导小鼠产生特异性细胞免疫应答。结论:重组减毒大肠杆菌在体外和体内均能有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。 | 潘志明 张晓明 焦新安 Richard Lo-Man Claude Leclerc 刘秀梵 | 2008 | 中国免疫学杂志2008，24，3： | 0 |
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