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| 1 | 伪狂犬病病毒gE基因在昆虫细胞中的表达显示文摘为获得具有天然活性的伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白,建立PRV gE抗体快速检测方法,将PRV gE基因克隆至p Fast Bac/HBM-TOPO载体,并转化含有杆状病毒穿梭质粒的DH10Bac E.coli,通过三重抗性和蓝白斑筛选,得到含有PRV gE基因的重组Bacmid,将其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。然后分别用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定和分析,结果表明,gE蛋白在杆状病毒表达系统中得到成功表达,并且具有良好的反应原性,这为建立PRV gE抗体快速检测方法提供了良好的抗原。 | 周金龙 王同燕 颜世君 谭菲菲 张许科 | 2016 | 中国兽医科学2016，46，2： | 7 |
| 2 | 伪狂犬病病毒gE/gI基因在昆虫细胞中的表达及鉴定显示文摘为获得具有生物活性的伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gE/gI蛋白,建立PRV抗体快速检测方法。将含有PRV gE、gI基因的质粒pFastBacdual-GP67-gE/gI转化至宿主菌,经位点特异性重组和蓝白斑筛选后获得重组杆粒rBacmid-gE/gI,转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。采用悬浮的Sf9细胞进行发酵并纯化产物,SDS-PAGE和Western blot分析镍柱纯化后的重组蛋白。结果显示,重组杆粒在4800 bp处克隆出预期大小的条带,表示重组杆粒构建成功。SDS-PAGE和Western blot表明,在50 ku和65 ku处出现预期大小的条带,能与PRV标准阳性血清特异性反应,不与PRV gE/gI缺失疫苗免疫血清反应。结果表明gE/gI重组蛋白具有良好的反应原性,为PRV抗体快速检测及区分PRV野毒感染和疫苗免疫奠定了基础。 | 申一兰 张强 朱艳平 刘佳 邢瑞林 岳锋 李鹏 何勇 张艳芳 孙国鹏 王选年 | 2020 | 动物医学进展2020，41，3： | 1 |
| 3 | 犬瘟热病毒囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及鉴定显示文摘为表达具有天然构象的犬瘟热病毒(CDV)囊膜糖蛋白融合蛋白(F)和血凝素蛋白(H),本研究扩增小熊猫源CDV驯化致弱株LP的F、H基因,克隆至pFastBacTM1载体中,测序验证后转化至DH10BacTM感受态细胞,同源重组获得穿梭质粒rBacmid-F、rBacmid-H,将其分别转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rpFB-F、rpFB-H,并将表达的重组融合蛋白(rF)和血凝素蛋白(rH)进行IFA和Western blot鉴定。以犬抗CDV高免血清对重组杆状病毒感染细胞进行IFA鉴定,在感染细胞的细胞膜上可见特异性荧光反应;以鼠抗F、H蛋白的主要抗原表位区多克隆抗体对重组杆状病毒感染细胞进行Western blot检测,可见相对分子质量为63和68ku左右的条带,分别为重组融合蛋白(rF)和血凝素蛋白(rH),大小与预期相符。两种囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中均成功表达,且具有良好的反应原性。本研究为CDV病毒样颗粒疫苗的开发等工作奠定了基础。 | 虞一聪 冯娜 闫飞虎 盖微微 王铁成 王化磊 郑学星 赵永坤 黄耕 杨松涛 高玉伟 夏咸柱 | 2015 | 畜牧兽医学报2015，46，6： | 1 |
| 4 | 小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株病毒样颗粒的构建及其免疫原性显示文摘为了构建具有天然构象的小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株病毒样颗粒,本试验扩增了Nigeria 75/1株M、F和H基因,并分别克隆至双启动子载体pFastBac^(TM) Dual中,构建含有双目的基因的重组供体质粒pFastBac^(TM) Dual-2M、pFastBac^(TM) Dual-2F和pFastBac^(TM) Dual-2H;测序正确后转化至DH10Bac^(TM) 感受态细胞,同源重组获得穿梭质粒rBacmid-2M、rBacmid-2F和rBacmid-2H;将其分别转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒rpFB-2M、rpFB-2F和rpFB-2H。以鼠抗M、H蛋白的主要抗原表位区多克隆抗体与绵羊抗PPRV阳性血清对重组杆状病毒感染细胞进行间接免疫荧光(IFA)鉴定,可见特异性荧光;以3种重组杆状病毒共感染昆虫细胞Sf9的方式组装病毒样颗粒,放大培养后进行病毒样颗粒纯化。Western blot检测纯化后样品可见相对分子质量为38 000,59 000,68 000左右的条带,表明基质膜蛋白与2种囊膜糖蛋白成功组装出病毒样颗粒,且免疫小鼠可诱导产生保护性中和抗体。本试验为后续小反刍兽疫病毒(PPRV)病毒样颗粒疫苗的进一步研发奠定了基础。 | 闫飞虎 赵梓淇 王化磊 赵永坤 邱泊宁 王建忠 王铁成 黄耕 高玉伟 冯娜 杨松涛 夏咸柱 | 2017 | 中国兽医学报2017，37，7： | 1 |
| 5 | 昆虫细胞表达基因ⅦNDVHN基因的免疫效力研究显示文摘利用杆状病毒表达系统对ⅦNDV HN基因进行表达研究。RT-PCR扩增HN基因,将其克隆到p Fast Bac HT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,碱裂解法提取阳性质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得含HN基因的重组杆状病毒质粒,重组病毒感染Sf9细胞72 h后,进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western-blot试验。免疫SPF鸡,间接ELISA测定抗体滴度,攻毒保护试验检测重组HN蛋白保护性。结果显示,目的蛋白HN在昆虫细胞中有特异性表达,该蛋白诱导了高滴度的NDV特异性抗体,具有良好的免疫原性;强毒攻击保护率达到75%,与La sota疫苗组保护率接近,均明显高于阴性对照组。上述结果为NDV新型亚单位疫苗奠定了基础。 | 王善辉 薛忠 汪鹏旭 李云龙 成子强 | 2016 | 安徽农业大学学报2016，43，1： | 1 |
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